形態(tài)及菌落觀(guān)察

【原理】  支原體形態(tài)多為球形小顆粒和較短的絲狀體，不易鑒別。 
    溶脲脲原體（Uu）在含95%氮氣和5%二氧化碳環(huán)境中生長(cháng)良好。其生長(cháng)最適pH為5.5—6.5，最適溫度為36—37℃。Uu具有脲酶，能分糖尿素產(chǎn)氨，使含酚紅指示劑的Uu液體培養液pH上升，顏色由黃色變?yōu)榧t色。再將液體培養物轉種到Uu固體培養液上，能生長(cháng)成具特征性荷包蛋樣菌落。 
1、液體培養液支原體肉湯培養液80ml，馬血清或小牛血清10ml，酵母浸液10ml，10%尿素溶液0.5—1.5ml，0.4%酚紅溶液0.5ml，青霉素（使其在培養液中的濃度為500—2000U/ml）用1mol/l氯化氫調pH至5.5—6.5，用小試管分裝后置冰箱中備用，每管1.52.0ml。接種標本后，經(jīng)孵育，若培養液發(fā)生由黃變紅的顏色變化，透明無(wú)混濁（有別于某些細菌及真菌生長(cháng)）則可初步判斷為有支原體生長(cháng)。大多數Uu在24小時(shí)內可獲得陽(yáng)性結果。 
2、固體培養液在200ml支原體肉湯培養液中，加入瓊脂1.2—1.4g，高壓滅菌后冷卻到50℃左右，逐一加人上述添加劑。搖勻，倒人無(wú)菌平皿中，待凝固后，置冰箱中備用。Uu在固體培養液上菌落核心呈粗顆粒狀，具極窄的邊，有時(shí)呈荷包蛋樣。 
    人型支原體（Mh）在有氧及無(wú)氧環(huán)境中均能生長(cháng)，在液體培養液中2—3日可見(jiàn)生長(cháng)，固體培養液上培養4—5日即可生出菌落。生長(cháng)條件除需膽固醇外，尚需要精氨酸。生長(cháng)的最適pH為7.0，最適溫度36—37℃,Mh具有精氨酸脫氫酶，能水解精氨酸產(chǎn)氨，使含酚紅指示劑的Mh液體培養液pH值上升，呈堿性，顏色由橙黃色變?yōu)榧t色。Mh和Uu一樣，不發(fā)酵葡萄糖，這與生殖支原體有區別。將液體培養物轉種到固體培養液上，能生長(cháng)成具有特征性的荷包蛋樣菌集落。培養液中不加尿素，需加入精氨酸，其他營(yíng)養成分與Uu相同。觀(guān)察結果同Uu。 
    生殖支原體（Mg）能發(fā)酵葡萄糖和其他碳水化合物，使培養液pH下降呈酸性，可使含酚紅指示劑的培養液出現由紅色變?yōu)辄S色的變化，但即使降至6.0以下，Mg仍可存活。Mg不能分糖精氨酸及尿素。它營(yíng)養要求復雜，須在不含醋酸鉈的SP-4培養液中才能生長(cháng)，而且生長(cháng)極緩慢。Mg在固體培養液上，置于含5%—10%二氧化碳和90%—95%的氮環(huán)境中，可形成荷包蛋樣集落。 
    肺炎支原體（Mp）以牛心消化液為基礎，加20%小牛血清及新鮮酵母浸液制成的液體或固體培養液。加入青霉素，可防止雜菌生長(cháng)。初次分離生長(cháng)緩慢，在含5%二氧化碳下培養，10天長(cháng)出荷包蛋狀菌落。能發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，不能利用精氨酸與尿素，可還原美藍，分離培養陽(yáng)性率不高。 
【材料】以溶脲脲原體為例。 
1、支原體固體培養液。 
2、溶脲脲原體固體培養液。 
3、姬姆薩染色液。 
【方法】 
1、標本采集女性：用擴陰器擴陰后，以無(wú)菌拭子取宮頸口分泌物，也可以取羊水，不推薦用尿液；男性：以無(wú)菌拭子取尿道分泌物、前列腺按摩液、精液或中段尿培養（中段尿10ml經(jīng)2000r/min離心10分鐘），取沉渣接種。 
2、接種好的培養液，置于35—37℃含5%—10%二氧化碳培養2—3天，每天觀(guān)察結果。 
3、菌落染色鏡檢。 
（1）用低倍鏡在平板上選擇一個(gè)菌落，用刀片切下帶菌落的瓊脂塊，置于一載玻片上，菌落面朝下。 
（2）將載玻片放入80—85℃的水中，見(jiàn)瓊脂發(fā)白脫落后取出玻片。 
（3）自然干燥，姬姆薩染色（染液作1;20稀釋?zhuān)�需�?小時(shí)以上）。 
【結果】  經(jīng)過(guò)培養，標本陽(yáng)性時(shí)，培養液呈紅色，低倍鏡下姬姆薩染色觀(guān)察，可見(jiàn)菌落被染成藍色，中央深、四周較淺，形狀似荷包蛋樣。   
   

 

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