伯氏疏螺旋體的血清學(xué)實(shí)驗

   伯氏疏螺旋體是引起萊姆病的病原體。病原學(xué)診斷的主要方法是分離培養、聚合酶鏈反應及血清學(xué)實(shí)驗。由于分離培養耗時(shí)長(cháng)，所以一般常用ELJSA技術(shù)檢測血清中的抗體，結果可疑時(shí)，再以免疫印跡技術(shù)證實(shí)。 
【材料】 
1、可疑萊姆病患者血清。 
2、ELJSA檢測抗伯氏螺旋體lgM抗體試劑盒 
（1）伯氏螺旋體41kd鞭毛蛋白抗原包被96孔酶標板。 
（2）陽(yáng)性、弱陽(yáng)性、陰性對照血清。 
（3）標本稀釋液。 
（4）酶標抗體（HRP標記羊抗人lgM）。 
（5）底物：用磷酸鹽-枸櫞酸緩沖液配置的TMB·H2O2。 
（6）反應終止液（1mol/l硫酸溶液）。 
（7）洗滌液。 
【方法】 
1、用標本稀釋液將患者血清按1：100稀釋?zhuān)�即�?ul血清與200ul標本稀釋液混合，置37℃20分鐘。 
2、各加100ul陽(yáng)性、弱陽(yáng)性、陰性對照及已稀釋待檢標本上清液于相應孔中，空白對照孔加100ul標本稀釋液，蓋好反應板，37℃孵育20分鐘。 
3、甩盡板中液體，用200—300ul洗滌液洗5次，每次均需拍干。  
4、每孔加酶標記抗體標抗人lgM抗體100ul，蓋好反應板，37℃孵育30分鐘。 
5、甩盡板中液體，洗5次，每次拍干。 
6、加底物TFMB-H2O2 100ul，混勻，37℃溫育15分鐘。 
7、加終止液1mol/l硫酸50ul，用酶標儀450nm測其OD值。 
【結果】 
1、陰性對照平均OD值須<0.20。 
2、弱陽(yáng)性對照平均OD值須在0.20—0.25。 
3、弱陽(yáng)性對照與陰性對照的平均OD值之比須大于或等于2。 
    符合以上3個(gè)條件，本次實(shí)驗結果可信，否則重復實(shí)驗。 
4、若待檢標本孔顯色比弱陽(yáng)性對照孔深，則判為陽(yáng)性，即以P/N>2.1為陽(yáng)性。 756   
   

 

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