鉤端螺旋體的分離培養

  鉤端螺旋體可以進(jìn)行人工培養，但其生長(cháng)要求較高，需用含8%—10%兔血清的Korthof培養液，血清在其中所起的作用，一方面是提供鉤端螺旋體生長(cháng)所需的生長(cháng)因子，另一方面可以中和鉤端螺旋體的代謝產(chǎn)物，有利于鉤端螺旋體的生長(cháng)。 
【材料】Korthof培養液，待檢標本（患者血液、尿液或可疑動(dòng)物的內臟） 
【方法】 
1、患者血液培養采集早期患者血液，無(wú)菌操作接種于2—3管Korthof培養管中，每管接種1—3滴。血培養管置28℃培養。每隔5—7天取培養物暗視野顯微鏡下觀(guān)察有無(wú)鉤端螺旋體生長(cháng)，若有生長(cháng)，即為分離陽(yáng)性。若未見(jiàn)生長(cháng)，需繼續培養60天，仍不見(jiàn)鉤端螺旋體方作陰性處理。 
2、患者尿液培養：留取病后兩周以上的患者中段尿30—50ml于無(wú)菌離心管中3500—4000r/min離心1小時(shí)。取沉渣0.3—0.5ml接種于2—4管上述培養液中，28℃孵育。每隔5—7天取材鏡檢。為提高檢出率和減少污染，可在采集尿標本的前一天晚上給患者服用碳酸氫鈉2—4g，同時(shí)，在培養液中加入100—400ug/ml5-氟尿嘧啶或1/2000的磺胺嘧啶。 
3、動(dòng)物腎臟培養無(wú)菌操作，采集新鮮動(dòng)物腎臟（包膜完整），剪取米粒大小接種于2—3管Korthof培養管中，置28℃培養。每隔5—7天取培養物置暗視野顯微鏡下觀(guān)察有無(wú)鉤端螺旋體生長(cháng)，若有生長(cháng)，即為分離陽(yáng)性。若未見(jiàn)生長(cháng)，需繼續培養60天，仍不見(jiàn)鉤端螺旋體生長(cháng)方作陰性處理。 
4、菌株分群、分型應用分群血清與新分離的鉤端螺旋體作凝集實(shí)驗，確定菌群。應用交叉凝集素吸收實(shí)驗或分型因子血清來(lái)確定菌型。    
   

 

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