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    鉤端螺旋體的顯微鏡凝集(顯凝)實(shí)驗



    錄入時(shí)間:2008/12/3 14:37:00 來(lái)源:青島海博生物

    【原理】  鉤端螺旋體顯凝實(shí)驗是一種血清學(xué)反應,可用已知的抗原(標準菌株)來(lái)測定患者血清中的未知抗體及其效價(jià)來(lái)進(jìn)行輔助診斷;也可用已知的抗體(標準免疫血清)來(lái)鑒定未知菌株的型別作血清學(xué)鑒定。鉤體運動(dòng)活潑,在暗視野顯微鏡下,明顯可見(jiàn),若遇到相應抗體時(shí)可發(fā)生凝集。如血清中的補體未滅活,時(shí)間過(guò)久出現凝集的鉤體發(fā)生溶解,則為鉤體的凝(集)溶(解)實(shí)驗。 
     【材料】 
    1、抗原的選擇和制備:將我國15群15型鉤端螺旋體代表株接種于:Korthof培養液中,28℃培養5—7天,暗視野顯微鏡檢查,暗視野顯微鏡400倍觀(guān)察每視野下不少于50條,運動(dòng)活潑且無(wú) 自凝者可作顯凝抗原。 
    2、鉤體免疫血清(家兔免疫血清)做血清學(xué)診斷時(shí)用疑似患者的血清。 
    3、1ml無(wú)菌吸管、無(wú)菌試管、清潔載玻片及蓋玻片、0.9%氯化鈉溶液、塑料凹孔板、24—28℃溫箱。 
    【方法】 
    1、用0.95氯化鈉溶液將鉤端螺旋體免疫血清自1:50開(kāi)始,做50倍系列稀釋?zhuān)钡?:1600。 
    2、取各稀釋度免疫血清0.1ml分別加入塑料凹孔板中,最后1孔加0.1ml0.9%氯化鈉溶液作對照。 
    3、每孔加0.1ml鉤端螺旋體純培養物,搖勻,置28—30℃溫箱。 
    4、2小時(shí)后用接種環(huán) 自各孔中取1—2環(huán)于載玻片上,置暗視野顯微鏡下觀(guān)察。 
    【結果】  先觀(guān)察陰性對照孔,該孔如出現凝集則實(shí)驗失敗。該孔無(wú)凝集時(shí)方能觀(guān)察實(shí)驗孔,根據凝集程度以“+”記錄結果,結果判定參照如下標準進(jìn)行。 
    -:完全無(wú)凝集,與對照管相同。 
    +:25% 以上鉤端螺旋體凝集呈小蜘蛛狀,大多數游離且運動(dòng)活潑。 
    + +:50%以上鉤端螺旋體凝集呈蜘蛛狀,約有半數未凝集。 
    + + +:75%以上鉤端螺旋體凝集呈蜘蛛狀,其間有少數游離。 
    + + + +:幾乎全部鉤端螺旋體凝集呈巨大蜘蛛狀,偶見(jiàn)極少數游離鉤端螺旋體存在。 
        效價(jià)判定:出現“+ +”的血清最高稀釋度(終末稀釋度———加入等量抗原后的稀釋度)為該血清的凝集效價(jià)。測定患者血清時(shí),單份血清效價(jià)1:300以上有診斷意義,雙份血清呈4倍以上升高時(shí),更有診斷價(jià)值。    
       

     

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