分枝桿菌屬的培養特性觀(guān)察

 結核分枝桿菌為專(zhuān)性需氧菌，培養要求特殊，生長(cháng)緩慢，37℃培養4—6周才出現肉眼可見(jiàn)的菌落，人工培養時(shí)pH6.5—6.8最為適宜。在液體培養液中生長(cháng)稍快，2—3周后可見(jiàn)菌膜生長(cháng)，臨床標本要培養至 , 2個(gè)月無(wú)菌生長(cháng)，且連續3次培養均無(wú)菌生長(cháng)才能報告結核分枝桿菌培養陰性。 
【材料】 
1、結核分枝桿菌在改良羅氏培養液上的培養物。 
2、恥垢分枝桿菌在改 良羅氏培養液上的培養物。 
【方法及結果】 
    結核分枝桿菌于改良羅氏培養液上生長(cháng)情況及菌落特點(diǎn)：生長(cháng)緩慢，菌落干燥呈顆粒狀、乳白色或米黃色、不透明、表面呈皺紋狀、形似花菜心的菌落。 
    恥垢分枝桿菌在改良羅氏培養液上生長(cháng)的菌落特點(diǎn)：生長(cháng)速度較快，5—7天可見(jiàn)菌落，菌落粗糙，有的能產(chǎn)色。涂片抗酸染色呈抗酸陽(yáng)性菌，多為短桿菌和球桿菌。但非結核分枝桿菌經(jīng)煮沸1min分鐘即失去抗酸性。 
    取少許上述兩種培養液上菌落置0.9%鈉溶液小滴中于玻片上研磨，恥垢分枝桿菌很易被乳化，但結核分枝桿菌不易被乳化。 
    非結核分枝桿菌在液體培養液中生長(cháng)，看不到結核分枝桿菌那種細菌相互粘連按縱軸平行排列成索狀的現象，即索狀因子陰性。 
    生化反應：非結核分枝桿菌與結核分枝桿菌的生化反應特性見(jiàn)表 。 
                  表    結核分枝桿菌與非結核分枝桿菌的生化特性 
    菌種         糖發(fā)酵     觸酶     熱觸酶     中性紅     碲鹽還原   索狀因子 
 結核分枝桿菌      -          +         -          +           -          +
非結核分枝桿菌     +          +         +         + -           +          -
觸酶實(shí)驗與熱觸酶實(shí)驗： 
（1）從羅氏培養液上各取生長(cháng)豐滿(mǎn)的人型結核分枝桿菌與堪薩斯分枝桿菌10mg左右，分別加入含0.067mol/l、PH7.4的PBS至1.0ml，并置于小試管中，制成細菌懸液。 
（2）分別將上述2種菌懸液（各1ml）裝入4支小試管中（各0.5ml），取2種菌懸液各1支置68℃水浴內保溫20分鐘，取出后冷卻至室溫，分別向4支菌懸液管內沿管壁徐徐加入新鮮配制的30%H2O2和10%吐溫-80等量混合液0.5ml，勿搖動(dòng)，觀(guān)察結果。 
（3）結果觀(guān)察：液面出現氣泡者為陽(yáng)性，20分鐘內無(wú)氣泡為陰性。未經(jīng)熱處理的2支菌均出現觸酶陽(yáng)性，經(jīng)加熱處理后，人型結核分枝桿菌熱觸酶實(shí)驗轉為陰性，而非結核分枝桿菌熱觸酶實(shí)驗仍為陽(yáng)性。   
   

 

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