玻片法凝集實(shí)驗為定性實(shí)驗，方法簡(jiǎn)便快速，但有時(shí)會(huì )出現非特異性的凝集。試管法凝集實(shí)驗則是鑒定細菌更為準確可靠的定量實(shí)驗。常用于腦膜炎球菌、霍亂弧菌、布魯菌、沙門(mén)菌的鑒定，試管法凝集實(shí)驗也可用于血清學(xué)診斷。下面以肥達實(shí)驗為例對實(shí)驗步驟進(jìn)行說(shuō)明。
肥達實(shí)驗是根據凝集反應的原理，用已知的傷寒沙門(mén)菌鞭毛抗原及菌體抗原、甲型副傷寒沙門(mén)菌鞭毛抗原、肖氏沙門(mén)菌鞭毛抗原與患者血清作定量凝集實(shí)驗，以協(xié)助診斷腸熱癥。
【材料】
1、傷寒沙門(mén)菌鞭毛抗原（H）、傷寒沙門(mén)菌菌體抗原（O）、甲型副傷寒沙門(mén)菌鞭毛抗原（A）、肖氏沙門(mén)菌鞭毛抗原（B）。
2、可疑患者血清、0.9%氯化鈉等。
【操作】
1、于試管架上放4排小試管，每排8支。
2、稀釋待檢患者血清取一中試管，加0.9%氯化鈉3.8ml和患者血清0.2ml，充分混勻，此時(shí)血清稀釋度為1：20，吸此血清2ml分別加入每排的第1管中，每管0.5ml。此時(shí)中試管內剩余稀釋血清2ml，再加入0.9%氯化鈉溶液2ml，使之稀釋成1：40。再加入每排的第2管中，每管0.5ml。以此類(lèi)推，將中試管內剩余血清依次作倍比稀釋?zhuān)⒁来螌⑾♂屟寮又撩颗诺?至第7管中，則每排各管的血清稀釋度依次為1：20，1;40，1:80，1:160，1:320，1:640，1:1280。每排第8管不加血清，只加0.5ml0.9%氯化鈉作為對照。
3、加入菌液：由第8管開(kāi)始 向前加入診斷菌液：
第一排各管加入傷寒沙門(mén)菌鞭毛抗原（H）菌液0.5ml。
第二排各管加入傷寒沙門(mén)菌菌體抗原（O）菌液0.5ml。
第三排各管加入 甲型副傷寒沙門(mén)菌鞭毛抗原（A）菌液0.5ml。
第四排各管加入 肖氏沙門(mén)菌鞭毛抗原（B）菌液0.5ml。
此時(shí)各管的血清稀釋度又各增加1倍，依次為1;40，1:80，1:160，1:320，1:640，1:1280，1：2560。每管總量1.0ml。
4、振蕩混勻，置3℃溫箱中溫育18—24h小時(shí)，取出觀(guān)察并記錄結果。
【結果】觀(guān)察結果時(shí)，先不要搖動(dòng)試管，觀(guān)察試管內上清液和管底細菌凝集的特點(diǎn)，然后輕搖試管使凝集物從管底升起，按液體的濁度、凝集塊的大小記錄凝集程度。另外觀(guān)察結果時(shí)，要先看陰性對照管，陰性對照管不凝集時(shí)，方可觀(guān)察實(shí)驗管，否則可能系菌液自凝引起，需更換診斷菌液重新檢測。
凝集程度以“+”多少表示。
+ + + +：上層液澄清透明，細菌全部凝集沉于管底。
+ + +：上層液基本透明，大部分細菌（75%）凝集沉于管底。
+ +：上層液半透明，管底有明顯（50%）凝集物。
+：上層液混濁，管底僅有少量凝集物。
一：不凝集，液體呈乳狀與對照管相同。
效價(jià)定義：能使定量抗原呈“+ +”凝集的血清最高稀釋度為該血清的凝集效價(jià)。
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