由于腸道中存在大腸埃希菌等很多條件致病菌,其與腸道致病菌的主要區別之一是:大多數條件致病菌可分解乳糖,而絕大多數腸道致病菌則不分解乳糖。故分離腸道致病菌多用含乳糖的弱選擇性鑒別培養液(如麥康凱瓊脂等)以及對大腸埃希菌等條件致病菌有較強抑制作用、而又有利于腸道某些致病菌(如沙門(mén)菌及志賀菌屬)生長(cháng)繁殖的強選擇性鑒別培養液。
本實(shí)驗主要介紹疑為沙門(mén)菌或志賀菌屬感染者或帶菌者的糞便標本(或直腸拭子)中致病菌的分離和鑒定。
【材料】
1、盛有糞便標本(或肛拭子)的無(wú)菌試管(作教學(xué)實(shí)驗時(shí)可考慮使用傷寒沙門(mén)菌或痢疾志賀菌屬與大腸埃希菌的混合菌作為模擬標本)。
2、四硫磺酸鹽(TT)增菌液、革蘭陰性桿菌(GN)增菌液。
3、麥康凱和SS瓊脂平板、雙糖培養液。
4、各種生化反應培養液及試劑(可參見(jiàn)微生物的 自動(dòng)分析及附錄)。
5、沙門(mén)菌多價(jià)“O”(A-F組)及單價(jià)“O”診斷血清、“H”因子診斷血清。
6、志賀菌屬多價(jià)及單價(jià)診斷血清。
【操作】
一、標本采集
由于糞便中細菌種類(lèi)很多,故應根據檢查目的的不同選擇適宜的培養液或用適當方法處理,盡可能地抑制雜菌,以利于病原菌的檢出。同時(shí),采集標本時(shí)應注意以下幾點(diǎn):
1、不能認為糞便中細菌含量多,糞便標本的采集就無(wú)須無(wú)菌操作。糞便標本的采集也應遵循無(wú)菌操作的原則。若便器或標本容器不潔而污染了變形桿菌,就可能影響病原菌的分離檢出,甚至把污染菌誤報,造成誤診。
2、采樣的時(shí)期應合適。疑似痢疾患者應在發(fā)病初期、用藥前采取標本。糞便標本采集時(shí)應挑取無(wú)尿液污染的有膿血、黏液部分的糞便2—3g(液狀糞便可挑取絮狀物),盛于無(wú)菌容器內送檢。在無(wú)法獲得糞便時(shí),可采用直腸拭子,即用滅菌棉拭子經(jīng)0.9%氯化鈉溶液或增菌培養液濕潤后,插入肛門(mén)內)4—5cm處,輕輕轉動(dòng)一圈后取出,插入無(wú)菌試管或保存液中送檢;疑似傷寒患者應在發(fā)病2—3周內采集糞便標本。
3、糞便標本如不能立即送檢,可將標本放入甘油鹽水保存液中,或保存于冰箱內(勿超過(guò)2小時(shí))。
二、檢查程序
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