正常情況下，機體的血液是無(wú)菌的，如果檢出細菌（排除污染）即有確診意義。葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌、大腸埃希菌、沙門(mén)菌、變形桿菌、銅綠假單胞菌和厭氧菌等均可引起菌血癥、敗血癥和膿毒血癥。對臨床表現酷似敗血癥而普通培養呈陰性者，應注意厭氧菌或L型菌感染的可能性。
【材料】
1、可疑敗血癥患者血標本。
2、肉湯、血瓊脂平板。
3、人血漿或兔血漿。
4、0.9%氯化鈉溶液、載玻片等。
【操作】
一、血標本的采取
1、盡可能于疾病早期、高熱期（陽(yáng)性率最高）、抗菌藥物治療前采血，并注意以無(wú)菌操作技術(shù)采集標本，并盡快送檢。
2、如已用過(guò)抗菌藥物，應在化驗單上注明使用過(guò)何種抗菌藥物，以便有關(guān)檢驗人員在進(jìn)行細菌培養時(shí)作適當處理。例如用過(guò)青霉素的，則應在培養液內加入青霉素酶；用過(guò)鏈霉素的，則應加入胱氨酸；用過(guò)磺胺的，則應加入對氨基苯甲酸；用過(guò)四環(huán)素族、多黏菌素、鏈霉素等的，可加入0.3%硫酸鎂，以消除藥物對細菌的抑制作用，提高陽(yáng)性率。
3、無(wú)菌操作采取靜脈血3—5ml，立即注入含30—50ml肉湯培養液的培養瓶中搖勻，以防血液凝固。因為血液中含抗體和補體等抗菌物質(zhì)，所以血液和肉湯培養液的比例一般以1：10為宜。如果血液過(guò)多，抗菌物質(zhì)未被充分稀釋?zhuān)瑫?huì )影響細菌的生長(cháng)繁殖；血液過(guò)少則細菌數量也少，兩者均會(huì )影響細菌檢出的陽(yáng)性率。
4、凡疑為厭氧菌引起的敗血癥時(shí)，應按厭氧培養程序對細菌進(jìn)行分離培養鑒定。血液中因含菌數較少，一般不作直接涂片鏡檢，首先接種在液體培養液中進(jìn)行增菌，然后再進(jìn)行分離鑒定。
二、鑒定程序
三、操作
1、增菌及分純
（1）將已接種血標本的肉湯培養液置37℃培養，逐日觀(guān)察，連續9天。無(wú)菌生長(cháng)者則肉湯呈清亮，血液呈鮮紅色沉于瓶底（如增菌培養結果為液體培養液外觀(guān)清亮，應在培養7天后，作盲目轉種血平板，血平板經(jīng)培養后仍無(wú)菌生長(cháng)者，方可報告為無(wú)菌生長(cháng)）；有細菌生長(cháng)，則可出現肉湯混濁、顆粒狀沉淀、菌膜、凝胨、色素產(chǎn)生、血液變?yōu)榘导t玫瑰色等現象。
（2）如增菌培養液中有菌生長(cháng)，則用無(wú)菌接種環(huán)挑取肉湯培養液之底部沉淀，劃線(xiàn)接種于血平板上，置37℃培養18—24h小時(shí)。
2、形態(tài)學(xué)初步鑒定：觀(guān)察血平板上菌落特征，取菌落涂片作革蘭染色鏡檢，根據菌落特點(diǎn)，結合染色結果得出初步鑒定結論。
3、生化鑒定
（1）觸酶實(shí)驗（過(guò)氧化氫酶實(shí)驗）：用接種環(huán)挑取固體培養液上的菌落，置于潔凈的試管內或玻片上，然后滴加3%過(guò)氧化氫溶液數滴，觀(guān)察結果。
結果判定：于半分鐘內有大量氣泡產(chǎn)生者為陽(yáng)性，不產(chǎn)生氣泡者為陰性。
絕大多數細菌均產(chǎn)生過(guò)氧化氫酶，但鏈球菌屬的細菌其觸酶實(shí)驗 陰性。故常用此實(shí)驗來(lái)鑒別葡萄球菌和鏈球菌。此實(shí)驗不宜用血平板上的菌落，因紅細胞內含有血紅素，而血紅素具有過(guò)氧化氫酶活性，故紅細胞可導致觸酶實(shí)驗假陽(yáng)性。此外，在陳舊培養物上細菌可失去觸酶活性。
（2）葡萄球菌凝固酶實(shí)驗：葡萄球菌凝固酶一般是由致病性葡萄球菌產(chǎn)生的一種能使枸櫞酸鈉或肝素抗凝的人或兔血漿發(fā)生凝固的酶類(lèi)物質(zhì)。血漿凝固酶實(shí)驗被廣泛用于常規鑒別金黃色葡萄球菌與其他葡萄球菌，是致病性葡萄球菌的一個(gè)主要鑒定依據。
（3）耐熱脫氧核糖核酸酶實(shí)驗：致病性葡萄球菌產(chǎn)生一種耐熱的DNA酶，能分解DNA。非致病葡萄球菌雖也能產(chǎn)生DNA酶，但不耐熱。因此，耐熱DNA酶測定可作為鑒定致病性葡萄球菌的一個(gè)重要指標。
（4）甘露醇發(fā)酵實(shí)驗：將金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌分別接種于甘露醇發(fā)酵管，其上覆蓋無(wú)菌液體石蠟油，37℃孵育18—24h小時(shí)觀(guān)察結果。致病性的葡萄球菌多能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，而非致病性的葡萄球菌如表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌均不能發(fā)酵甘露醇。
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