細菌內毒素檢查

系利用從鱟的變形細胞中提取的試劑來(lái)檢測或量化由革蘭陰性菌產(chǎn)生的細菌內毒素，以判斷供試品中細菌內毒素的含量是否符合規定的一種方法。包括凝膠法和光度測定法兩種方法，后者包括濁度法和顯色基質(zhì)法。供試品檢測時(shí)，可使用其中任何一種方法進(jìn)行試驗。當測定結果有爭議時(shí)，除另有規定外，以凝膠法結果為準。 
    細菌內毒素的量用內毒素單位（EU）表示。 
    細菌內毒素國家標準品系自大腸埃希菌提取精制而成，用于核定、復核、仲裁鱟試劑靈敏度和標定細菌內毒素工作標準品的效價(jià)。 
    細菌內毒素工作標準品系以細菌內毒素國家標準品為基準標定其效價(jià)，用于試驗中試劑靈敏度復核、干擾試驗及設置的各種陽(yáng)性對照。 
    細菌內毒素檢查用水系指與靈敏度為0.03EU/ml或更高靈敏度的鱟試劑在371℃士1℃條件下24h不產(chǎn)生凝集反應的滅菌注射用水。細菌內毒素定量測定用的檢查用水，其內毒素的含量應小于0.005EU/ml。 
    試驗所用的器皿需經(jīng)處理，以去除可能存在的外源性?xún)榷舅�。常用的方法是�?50℃干烤至少1h，也可用其他確證不干擾細菌內毒素檢查的適宜方法。若使用塑料器械，如微孔板和與微量加樣器配套的吸頭等，應選用標明無(wú)內毒素并且對試驗無(wú)干擾的器械。試驗操作過(guò)程應防止微生物的污染。 
1、供試品溶液的制備某些供試品需進(jìn)行復溶、稀釋或在水性溶液中浸提制成供試品溶液。一般要求供試品溶液的pH在6.0—8.0的范圍內。對于過(guò)酸、過(guò)堿或本身有緩沖能力的供試品，需調節被測溶液（或其稀釋液）的pH，可使用酸、堿溶液或鱟試劑生產(chǎn)廠(chǎng)家推薦的適宜的緩沖劑調節pH。酸或堿溶液需用檢查用水在已去除內毒素的容器中進(jìn)行配制。緩沖劑必須經(jīng)過(guò)驗證不含內毒素和干擾因子。 
2、內毒素限值的建立藥品、生物制品的細菌內毒素限值（L）一般按式L=K/M確定： 
   式中L為供試品的細菌內毒素限值，以Eu/ml，Eu/mg或Eu/U活性單位表示；K為按規定的給藥途徑，人用每千克體重每小時(shí)最大可接受的內毒素劑量。
3、確定最大有效稀釋倍數最大有效稀釋倍數（MVD）是指供試品溶液被允許稀釋的最大倍數，在此稀釋倍數下可進(jìn)行內毒素限值的檢測。
        MVD=cL/入    
   

 

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