抗生素微生物檢定——管碟法 1

  抗生素微生物檢定系在適宜條件下，根據量反應平行線(xiàn)原理設計，通過(guò)檢測抗生素對微生物的抑制作用，計算抗生素活性（效價(jià)）的方法。它包括兩種方法，管碟法和濁度法。 
  測定結果經(jīng)計算所得的效價(jià)，如低于估計效價(jià)的90%或高于估計效價(jià)的1105時(shí)，應調整其估計效價(jià)，重新試驗。除另有規定外，本法的可信限率不得大于5%。 
  管蝶法系利用抗生素在瓊脂培養基內的擴散作用，比較標準品與供試品兩者對接種的試驗菌產(chǎn)生抑菌圈的大小，測定供試品效價(jià)的一種方法。 
1、菌懸液的制備 
（1）枯草芽孢桿菌懸液取枯草芽孢桿菌的營(yíng)養瓊脂斜面培養物，接種于盛有營(yíng)養瓊脂培養基的培養瓶中，在35—37℃培養7d，用革蘭染色法涂片鏡檢，應有芽孢85%以上。用滅菌水將芽孢洗下，在65℃加熱30min，備用。 
（2）短小芽孢桿菌懸液取短小芽孢桿菌的營(yíng)養瓊脂斜面培養物，照上述方法制備。 
（3）金黃色葡萄球菌懸液：取金黃色葡萄球菌的營(yíng)養瓊脂斜面培養物，接種于營(yíng)養瓊脂斜面上，在35—37℃培養20—22h。臨用時(shí)，用滅菌水或0.9%滅菌氯化鈉溶液將菌苔洗下，備用。 
（4）藤黃微球菌懸液取藤黃微球菌的營(yíng)養瓊脂斜面培養物，接種于盛有營(yíng)養瓊脂培養基的培養瓶中，在26—27℃培養24h，或采用適當方法制備的菌斜面，用培養基III或0.9%滅菌氯化鈉溶液將菌苔洗下，備用。 
（5）大腸埃希菌懸液取大腸埃希菌的營(yíng)養瓊脂斜面培養物，接種于營(yíng)養瓊脂斜面上，在35—37℃培養20—22h。臨用時(shí)，用滅菌水將菌苔洗下，備用。 
（6）啤酒酵母菌懸液取啤酒酵母菌V的號培養基瓊脂斜面培養物，接種于IV號培養基瓊脂斜面上。在32—35℃培養24h，用滅菌水將菌苔洗下置含有滅菌玻璃珠的試管中，振搖均勻，備用。 
（7）肺炎克雷伯菌懸液取肺炎克雷伯菌的營(yíng)養瓊脂斜面培養物，接種于營(yíng)養瓊脂斜面上，在35—37℃培養20—22h。臨用時(shí)，用滅菌水將菌苔洗下，備用。 
（8）支氣管炎博特菌懸液取支氣管炎博特菌的營(yíng)養瓊脂斜面培養物，接種于營(yíng)養瓊脂斜面上，在32—35℃培養24h。臨用時(shí)，用滅菌水將菌苔洗下，備用。 
2、標準品溶液的制備標準品的使用和保存，應照標準品說(shuō)明書(shū)的規定。 
   供試品溶液的制備：精密稱(chēng)（或量）取供試品適量，用各藥品項下規定的溶劑溶解后，再按估計效價(jià)或標示量的規定稀釋至與標準品相當的濃度。 
3、雙碟的制備取直徑約90mm，高16—17mm的平底雙碟，分別注入加熱融化的培養基20ml，使在碟底 內均勻攤布，放置水平面上使凝固，作為底層。另取培養基適量加熱融化后，放冷至48—50℃（芽孢可至60℃），加入規定的試驗菌懸液適量（能得清晰的抑菌圈為度。二劑量法標準品溶液的高濃度所致的抑菌圈直徑在18—22mm，三劑量法標準品溶液的中心濃度所致的抑菌圈直徑在15—18mm），搖勻，在每一雙碟中分別加入5ml，使在底層上均勻攤布，作為菌層。放置在水平臺上冷卻后，在每一雙碟中以等距離均勻安置不銹鋼小管（內徑6.0mm士0.1mm，高10.0mm士0.1mm，外徑7.8mm士0.1mm）4個(gè)（二劑量法）或6個(gè)（三劑量法），用陶瓦圓蓋覆蓋備用。 
4、檢定法 
（1）二劑量法取照上述方法制備的雙碟不得少于4個(gè)，在每一雙碟中對角的2個(gè)不銹鋼小管中分別滴裝高濃度及低濃度的標準品溶液，其余2個(gè)小管中分別滴裝相應的高低兩種濃度的供試品溶液；高、低濃度的劑距為2：1或4：1。在規定條件下培養后，測量各個(gè)抑菌圈直徑（或面積），照生物檢定統計法中的法進(jìn)行可靠性測驗及效價(jià)計算。 
（2）三劑量法取照上述方法制備的雙碟不得少于6個(gè)，在每一雙碟中間隔的3個(gè)不銹鋼小管中分別滴裝高濃度（S3）、中濃度（S2）及低濃度（S1）的標準品溶液，其余3個(gè)小管中分別滴裝相應的高、中、低3種濃度的供試品溶液；高、低濃度的劑距為1：0.8。在規定條件下培養后，測量各個(gè)抑菌圈直徑（或面積 ），照生物檢定統計法中的（3.3）法進(jìn)行可靠性測驗及效價(jià)計算。   
   

 

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