支原體的掃描電鏡檢測

   
1、原理 
   利用電子顯微鏡的超級放大功能，可直接觀(guān)察培養細胞中支原體污染情況。 
2、操怍方法 
 ①細胞傳代至貼有蓋玻片的平皿中；②培養24h取出；③PSB洗滌；④2.5%戊二醛/ PSB固定15min，PSB洗滌；⑤1%鋨酸固定30min，PSB洗滌；⑥乙酸異戊酯脫水；⑦冰點(diǎn)干燥；⑧噴金；⑨掃描電鏡觀(guān)察，照相 
   綜上所述，幾種不同的方法各有特點(diǎn)，其應用也各有側重。①支原體培養法是最為經(jīng)濟和可靠的方法，但其實(shí)驗周期較長(cháng)，所以常用于進(jìn)行對懷疑細胞的最后甄別。②DNA染色法較為快捷，方法簡(jiǎn)單，但其靈敏度有一定欠缺，易造成漏檢。③PCR檢測支原體的方法最為快速、靈敏，取樣量少，既可進(jìn)行細胞檢測也可進(jìn)行細胞上清的檢測，同時(shí)可以檢測8種支原體的污染，是目前常用的檢測手段。但其成本較高，條件要求嚴格，有時(shí)易出現假陽(yáng)性。其彌補的方法是對懷疑的樣品經(jīng)過(guò)3次PCR檢測，或用培養法檢測。④電鏡法非常直觀(guān)、準確，但對使用環(huán)境要求高，操作復雜，實(shí)驗周期較長(cháng)，常作為樣品的最后定性檢測。  

 

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