隱球菌的鑒定

1、材料 
（1）標本：腦脊液、痰、膿、尿、活體組織及人體解剖材料等。 
（2）試劑：墨汁、沙氏固體培養基、小白鼠。 
2、方法 
（1）標本采集：采集腦脊液、痰、膿、尿、活體組織及人體解剖材料等。 
（2）直接檢查：將樣品經(jīng)墨汁染色后鏡檢，查看有無(wú)圓形或卵圓形的芽生孢子，孢子外面有一肥厚的莢膜，莢膜比菌體可大1—3倍。出芽可為單芽，也可為多芽，孢子內可見(jiàn)有一個(gè)較大反光顆粒（脂質(zhì)顆粒）和許多小顆粒。 
（3）培養檢查：將樣品接種在沙氏固體培養基上，置25—37℃培養均可生長(cháng)，24—48h形成酵母樣菌落，少數菌株生長(cháng)緩慢，至少要培養2—3周才能形成菌落，菌落呈不規則圓形。開(kāi)始時(shí)為白色，透明發(fā)亮，表面光滑凸起，為酵母型菌落，日久菌落增厚，表面黏稠。顏色由乳 白、奶油色轉為橘黃色。鏡檢可見(jiàn)有許多芽生細胞，有時(shí)也可見(jiàn)到芽管。 
（4）進(jìn)一步鑒定可做以下試驗：酚氧化酶試驗、尿素酶試驗、糖同化及發(fā)酵試驗、PCR檢測等。 
（5）鑒定有無(wú)致病性：把分離到的細菌制成懸液，給小白鼠腹腔注射（0.5ml/只 ）或腦內注射（0.02ml/l只），觀(guān)察有無(wú)發(fā)病死亡的情況。有致病性的新型隱球菌一般于接種小鼠后2—3周內小鼠死亡。 
（6）血清學(xué)試驗：腦脊液和血清可用于檢測抗原或抗體，常用乳膠凝集試驗。但在治療收效后，抗原滴度可下降�？贵w能凝集隱球菌的酵母細胞或表層上附著(zhù)的抗原顆粒。   
   

 

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