真菌的培養方法——玻片培養

   玻片培養又稱(chēng)小培養，小培養法可以隨時(shí)觀(guān)察真菌的生長(cháng)形態(tài)（如大分生孢子、小分生孢子及孢子柄等），還可以隨時(shí)觀(guān)察其生長(cháng)發(fā)育的全部情況，有利于菌種的鑒定。 
1、鋼環(huán)法 
（1）材料：白假絲酵母菌、沙保弱培養基、無(wú)菌玻片、蓋玻片、鋼環(huán)（帶有缺 口）、石蠟。 
（2）方法 
①用無(wú)菌鑷子取無(wú)菌小培養鋼環(huán)，環(huán)的兩面分別蘸取熔化的固體石蠟，平置于無(wú)菌載玻片上，另取一無(wú)菌蓋玻片，在酒精燈火焰上加熱后覆蓋于鋼環(huán)上，待冷后，小培養鋼圈即被固定于載玻片與蓋玻片之間。 
②用毛細滴管吸取融化的培養基，從鋼環(huán)上端孔注入，注入量占容積的1/2即可。 
③培養基冷卻凝固后，用接種針挑取材料，由上端孔接種于環(huán)內培養基上。 
④置濕盒內，室溫或37℃下培養2—3d后，逐日觀(guān)察，鏡下可連續看到真菌生長(cháng)過(guò)程及菌絲、孢子等特征，一般7d左右即可長(cháng)好。 
⑤也可不用小培養鋼環(huán)，直接將融化的培養基滴于無(wú)菌玻片上，待冷凝后從周邊接種材料，用蓋玻片覆蓋后培養，在顯微鏡下連續觀(guān)察生長(cháng)情況。 
（3）結果：鏡下觀(guān)察可見(jiàn)到有胞壁增厚的厚膜孢子及假菌絲。 
2、小塊瓊脂玻片培養法 
   用無(wú)菌操作法將制好的待用瓊脂平板用無(wú)菌接種針或接種環(huán)切成大約1cm2的方塊，將其放置于滅菌的載玻片上。將標本或待檢菌接種于瓊脂塊四周邊緣靠上方部位，然后用無(wú)菌鑷子取一無(wú)菌的蓋玻片蓋在瓊脂上。在無(wú)菌平皿內放入少量無(wú)菌水和一個(gè)無(wú)菌U形（或V形）玻璃棒。將此載玻片置于玻璃棒上，蓋上平皿蓋培養。每日用肉眼和顯微鏡觀(guān)察孢子和菌絲的特點(diǎn)。   
   

 

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