真菌的一般檢驗法——不染色標本直接檢驗法

  真菌的一般檢驗法為直接鏡檢觀(guān)察是否有菌絲、孢子或菌體，檢出循環(huán)抗原等。直接鏡檢對真菌病診斷很重要，尤其對威脅生命的真菌病，快速、準確的非培養診斷法是非常必要的。 
 
    不染色標本直接鏡檢除部分深部感染真菌可初步確定菌種外，大部分淺部感染真菌僅能確定真菌菌絲和有無(wú)孢子，很難確定為何種真菌感染。 
1、材料 
①標本。甲屑、皮屑、毛發(fā)等固體標本；膿汁、尿沉渣、分泌物等液體標本。 
②試劑。100g/lNaOH或KOH溶液；生理鹽水。 
③其他。小鑷子、蓋玻片、載玻片。 
方法 
（1）制片方法將甲屑、皮屑、毛發(fā)等 固體標本置滅菌潔凈載玻片上，加一滴封固劑（100g/lNaOH或KOH溶液），蓋上蓋玻片，微加熱使角質(zhì)軟化，輕壓蓋玻片，使標本變薄、透明，并驅除氣泡。膿汁、尿沉渣、分泌物等標本僅用無(wú)菌生理鹽水稀釋即可。 
（2）檢驗方法：先用低倍顯微鏡檢查，當查到可疑為真菌孢子或菌絲時(shí)，再換高倍鏡檢查，觀(guān)察記錄菌絲和孢子。許多標本不需染色即可直接鏡檢。如觀(guān)察分生孢子的發(fā)育需放大1000倍。有些結構如分生孢子梗上產(chǎn)生的瓶梗需用相差顯微鏡才看得清楚。某些病原性真菌如莢膜組織胞漿菌、皮炎芽生菌、粗球孢子菌感染病人標本中，直接檢出與這些病原菌形態(tài)特征符合的真菌時(shí)，結合臨床表現容易作出明確診斷。如果檢出的是正常菌群，要確定其病原性比較困難。在酸中毒的糖尿病病人暴發(fā)急性感染時(shí)，如檢出寬或波形不分隔的菌絲則應考慮毛霉菌病。直接檢出的結果也有助于實(shí)驗室進(jìn)一步診斷，有助于采取恰當的檢驗步驟和措施（如選擇特殊的培養基和確定適宜的孵育時(shí)間）。但是，直接檢查也有其局限性，因為陰性結果也不能排除真菌感染，直接檢查不如培養法敏感，其敏感性也隨標本類(lèi)型、數量、采集時(shí)間和質(zhì)量等而有不同；也有假陽(yáng)性結果，溶解的淋巴細胞在腦脊液印度墨汁濕片中易誤認為新型隱球菌；脂肪微滴也可能與出芽酵母細胞混淆。出現可疑結果時(shí)應進(jìn)行復查，或采用其他檢驗步驟。除花斑癬病原菌培養有困難只能依據直接鏡檢診斷外，一般標本應進(jìn)一步作培養檢查。

 

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