組織培養技術(shù)—組織培養原理1

     將人或動(dòng)物離體的活組織或分散的活細胞，在實(shí)驗室的試管或培養瓶中，模擬體內的生理條件使之生存和生長(cháng)，稱(chēng)為組織培養。包括器官培養、組織塊培養和細胞培養。 
1、組織來(lái)源 
   人、猴、嚙齒類(lèi)動(dòng)物、禽的胚胎和臟器為組織培養常見(jiàn)的組織來(lái)源，對于蟲(chóng)媒病毒可使用蚊組織，手術(shù)切除的癌瘤組織可用于建立傳代細胞。組織要保持新鮮，一般須在6h內處理。 
2、單細胞的制備 
   組織分散成單細胞的方法主要有3種：機械分散法、酶消化法、螯合劑分散法。后兩種方法多與機械法結合使用。 
（1）機械分散法：適用于細胞間連接較松的組織，如雞胚組織�？蓪㈦u胚剪成1mm3的小塊，放在底部有一塊銅絲網(wǎng)的10—20ml注射器內，用手的壓力將組織細胞擠過(guò)網(wǎng)孔。脾臟組織的分散可將脾組織放在無(wú)菌平皿中，用1ml注射器芯輕壓，使細胞出來(lái)。 
（2）酶消化法：目前主要用胰酶，它能消化細胞間的蛋白質(zhì)成分。組織塊受胰蛋白酶作用后細胞變?yōu)閳A形，再用吸管機械吹打或電動(dòng)攪拌細胞可分散。胰蛋白酶用的濃度過(guò)大或時(shí)間過(guò)長(cháng)對細胞均有損害，影響細胞的生長(cháng)。一般用2.5—5g/l的胰酶，消化液量為消化物的5—10倍，37℃作用20—30min，大的組織塊可作用60min，pH值范圍一般在7.4—7.6。 
（3）螯合劑分散法：鈣離子和鎂離子是細胞結合的離子。單層細胞在缺少鈣、鎂離子的環(huán)境下，細胞變圓，分散為單細胞。乙二胺四乙酸容易與鈣、鎂螯合而使細胞間及細胞與玻璃培養瓶間的鈣、鎂離子螯合，而達到細胞分散的目的，但對于新鮮組織的分散效果不佳，故多用于單層細胞的分散。乙二胺四乙酸不受血清的抑制，所以，消化后需用Hanks液洗去殘留乙二胺四乙酸，以免影響細胞生長(cháng)。    
   
   

 

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