莢膜染色法— 實(shí)驗方法

   
（1）黑斯莢膜染色法 
①在莢膜菌涂片上（在空氣中 自然干燥，無(wú)需加熱固定）放一小塊濾紙片，之后滴加結晶紫染液。 
②在火焰上微微加熱，使玻片上染液 冒蒸汽為止。 
③用200g/l硫酸銅水溶液沖洗染液，切勿用流水沖洗。用吸水紙吸干后油鏡檢查。 
結果：菌體呈紫色，莢膜呈淡紫色或無(wú)色。 
（2）密爾莢膜染色法 
①制片。常規法制片，干后加熱固定。 
②染色。加石炭酸復紅液。微加熱染1min，水洗。 
③媒染。加特殊媒染劑，作用0.5min，水洗。 
④復染。加堿性美藍液，染1min，水洗。 
⑤鏡檢。干后油鏡檢查。 
    結果：菌體呈鮮紅色，莢膜呈藍色。 
（3）奧爾特莢膜染色法涂片、自然干燥、火焰 固定后滴加染液，經(jīng)火焰加溫使染液產(chǎn)生蒸汽后，繼續染3min，水洗，待干，鏡檢。 
    結果：菌體呈赤褐色，莢膜呈黃色。 
（4）濕墨水負染法 
①加一滴墨水于潔凈的載玻片上，然后挑取少量菌體與其混合均勻。 
②將一潔凈蓋玻片蓋在混合液上，然后在蓋玻片上放一張濾紙，輕輕按壓以吸去多余的混合液。加蓋玻片時(shí)勿產(chǎn)生氣泡，以免影響觀(guān)察。 
③高倍鏡或油鏡檢查。 
   結果：背景灰色，菌體較暗，在菌體周?chē)�呈現明亮的透明圈。 
（5）干墨水負染法 
①加一滴60g/l葡萄糖液于潔凈載玻片的一端，然后挑取少量菌體與其混合，再加一環(huán)墨水，充分混勻。 
②另取一端邊緣光滑的載玻片作推片，將推片一端的邊緣置于混合液前方，然后稍向后拉，當推片與混合液接觸后，輕輕左右移動(dòng)，使之沿推片接觸的后緣散開(kāi)，爾后以大約30°角迅速將混合液推 向玻片另一端，使混合液鋪成薄層。 
③空氣中自然干燥 。 
④用甲醇浸沒(méi)涂片固定1min，棄去 甲醇。 
⑤在酒精燈上方用文火干燥 。 
⑥用甲基紫染1—2min。 
⑦用自來(lái)水輕輕沖洗，自然干燥 。 
⑧高倍鏡或油鏡檢查。 
  結果：背景灰色，菌體紫色，菌體周?chē)鸀榍逦�透明的莢膜。 
（6）石炭酸復紅液染色法 
①取培養了72h的莢膜菌制成涂片，自然干燥（不可用火焰烘干）。 
②滴加1—2滴95%酒精固定（不可加熱固定）。 
③加石炭酸復紅染液染色1—2min，水洗，自然干燥 。 
④在載玻片一端加一滴墨水，用一塊邊緣光滑的載玻片與墨水接觸，再以勻速推向另端，涂成均勻的一薄層，自然干燥 。 
⑤干燥后用油鏡觀(guān)察。 
   結果：菌體紅色，莢膜無(wú)色，背景黑色。

 

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