細菌染色標本檢查法—抗酸染色法—萋-尼抗酸染色法1

   
   （1）實(shí)驗材料 
①染色液。石炭酸復紅液、堿性美藍溶液、3%鹽酸酒精。 
②菌種。含結核分枝桿菌的痰標本。 
③其他。普通玻片、酒精燈、接種環(huán)及顯微鏡等。 
（2）實(shí)驗方法 
①涂片 
a、直接涂片和厚膜涂片。用接種環(huán)挑取約0.01ml膿性或呈干酪樣部分痰液，制成10mm*10mm大小的均勻薄涂片，或取上述標本約0.1ml，制成20mm*15mm大小的厚膜涂片。自然干燥，火焰固定后，行抗酸染色或金胺“0”熒光染色，鏡檢。 
b、集菌涂片。І、沉淀集菌法。取痰液2—3ml，40g/lNaOH1—2倍量混勻。經(jīng)103.43Pa高壓滅菌20—25min（或煮30min），3000r/min離心30min，棄上清液，取沉淀物涂片做抗酸染色或金胺“0”熒光染色鏡檢；П、漂浮集菌法。取晨痰2—3ml放入100ml三角瓶?jì)�，�?—2倍量40g/lNaOH溶液，經(jīng)103.43Pa高壓滅菌20—25min（或煮30min）。冷卻后滴加汽油0.3ml，瓶口蓋玻璃紙加塞，塞緊瓶口，置振蕩器或手搖振蕩10min，再加蒸餾水至滿(mǎn)瓶口而又不外溢，靜置10—15min，將已編號的潔凈載玻片蓋在瓶口上，靜置15—20min，取下載玻片并迅速將載玻片翻轉至浸膜向上，或用接種環(huán)取瓶口液面物涂于載玻片上，自然干燥，火焰固定后做抗酸染色或金胺“0”熒光染色，鏡檢。 
②染色 
a、初染，在已固定的結核分枝桿菌痰標本涂片上放一小塊濾紙片，之后滴加數滴石炭酸復紅液后，將標本片放在火焰高處徐徐加溫，當涂片上液體出現蒸汽時(shí)離開(kāi)火焰（切不可煮沸），待玻片稍冷卻后補充染液（以防干燥或玻片斷裂 ），如此維持染色3—5min，待玻片冷卻后用水沖洗，甩干。 
b、脫色，在涂片上滴加數滴3%鹽酸酒精，輕輕晃動(dòng)玻片，直至無(wú)紅色液體流下為止，一般作用1—3min，水洗，甩干。 
c、復染，滴加數滴堿性美藍液于涂片上，作用1min后，水洗，甩干。用吸水紙印干標本片或 自然干燥后油鏡檢查。

 

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