細菌染色標本檢查法—革蘭染色法

   
    細菌標本經(jīng)染色后，與周?chē)�環(huán)境在顏色上形成鮮明的對比，可在普通光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察細菌的形態(tài)特征。 
1、實(shí)驗材料 
（1）染色液結晶紫溶液、盧戈碘液、95%酒精、稀釋石炭酸復紅液。 
（2）菌種大腸桿菌和葡萄球菌6—12h肉湯混合培養物。 
（3）其他普通玻片、酒精燈、接種環(huán)等。 
2、實(shí)驗方法 
（1）細菌標本片制備 
①涂片。取一張潔凈載玻片，將變形桿菌液體培養物直接涂布于載玻片上；或先在載玻片上放置一接種環(huán)生理鹽水，再取固體培養基上少許葡萄球菌與生理鹽水磨勻，涂成直徑1cm大小的區域。取菌量不可太多，使鹽水磨成灰白色為宜。 
②干燥 。涂片最好在室溫下自然干燥，或將標本面向上，置于酒精燈火焰高處慢慢烘干，切不可放在火焰上燒干。 
③固定。干燥后的標本片迅速通過(guò)火焰3次，既可達到殺菌的目的，又能固定細菌在玻片上，以免玻片上細菌在染色中被沖洗掉。 
（2）染色 
①初染。滴加結晶紫液2—3滴于涂片上，作用1min后，用細流水沖洗，甩干。 
②媒染。滴加盧戈碘液數滴于涂片上，作用1min后用流水沖洗，甩干。 
③脫色。滴加95%酒精數滴，輕輕晃動(dòng)玻片，使玻片上流下的酒精液無(wú)紫色為止（時(shí)間靈活掌握，大約0.5min左右），用流水沖洗，甩干。 
④復染。滴加稀釋石炭酸復紅液數滴，作用1min后，用流水沖洗，甩干。最后用吸水紙印干標本片或 自然干燥后，玻片上滴加鏡油，用顯微鏡油鏡觀(guān)察。 
3、實(shí)驗結果 
   葡萄球菌最后被染成紫色，呈葡萄狀排列；變形桿菌被染成紅色，單個(gè)散在分布。 
4、影響因素 
（1）操作因素涂片太厚或太薄，菌體分散不均勻，可影響染色結果。固定時(shí)避免菌體過(guò)分受熱。脫色時(shí)間要根據涂片厚薄靈活掌握。 
（2）染液因素：所有染液應防止水分蒸發(fā)而影響濃度，特別是盧戈碘液久存或受光作用后易失去媒染作用。脫色酒精以95%濃度為宜，若瓶密封不良或涂片上積水過(guò)多，可使酒精濃度下降而影響其脫色能力。
（3）細菌因素：不同時(shí)間培養物，革蘭染色結果有差異，如葡萄球菌幼齡菌染成紫色，而老齡菌可被染成紅色。細菌染色時(shí)一般用18—24h的細菌培養物為宜。

 

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