不染色標本一般用于觀(guān)察細菌動(dòng)力及運動(dòng)情況,因為不染色標本直接在普通光學(xué)顯微鏡下,不能清楚看到細菌的形態(tài)與結構特征。細菌未染色時(shí)無(wú)色透明,在顯微鏡下主要靠細菌的折射率與周?chē)h(huán)境不同進(jìn)行觀(guān)察。有鞭毛的細菌在鏡下呈活潑有方向的運動(dòng),無(wú)鞭毛的細菌則呈不規則布朗運動(dòng)。常用的方法有壓滴法、懸滴法。
1、實(shí)驗材料
(1)菌種 變形桿菌6—12h肉湯培養物、葡萄球菌6—12h肉湯培養物。
(2)玻片 普通玻片、凹玻片、蓋玻片。
(3)其他 吸管、酒精燈、接種環(huán)、凡士林等。
2、實(shí)驗方法
(1)懸滴法
①取2張潔凈凹玻片,在凹窩四周涂少許凡士林。
②用接種環(huán)各取 ! 環(huán)變形桿菌、葡萄球菌培養物分別置于兩片蓋玻片中央。
③將凹玻片倒合于蓋玻片上,使凹窩中央正對菌液。
④迅速翻轉載玻片,用小鑷子輕壓,使蓋玻片與凹窩邊緣粘緊封閉,以防水分蒸發(fā)。
⑤先用低倍鏡找到懸滴邊緣,再換高倍鏡,觀(guān)察時(shí)應下降聚光器,縮小光圈,減少光亮,使背景較暗易于觀(guān)察。
(2)壓滴法
①用接種環(huán)取2—3環(huán)菌液置于潔凈載玻片中央。
②用小鑷子夾1塊蓋玻片輕輕覆蓋在菌液上,放置蓋玻片時(shí)應注意,先將蓋玻片的一端接觸菌液,緩緩放下。以免產(chǎn)生氣泡。
③先用低倍鏡觀(guān)察,找到細菌所在部位后再換高倍鏡觀(guān)察,看細菌能否運動(dòng)。
3、實(shí)驗結果
變形桿菌有鞭毛,運動(dòng)活潑,可向不同方向迅速運動(dòng)。葡萄球菌無(wú)鞭毛,不能做真正運動(dòng),只能在一定范圍內做位移不大的顫動(dòng),這是受水分子撞擊而呈分子運動(dòng)(布朗運動(dòng))。
檢查細菌動(dòng)力時(shí)需注意區分真正運動(dòng)和分子運動(dòng),前者是由于細菌鞭毛引起的有方向性的位移。而后者是因水分子撞擊細菌而引起的布朗運動(dòng),只在原地顫動(dòng),無(wú)鞭毛的細菌僅有此種分子運動(dòng)。另外,需注意標本片制好后應盡快觀(guān)察,以免水分蒸發(fā)影響觀(guān)察結果。
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