微生物鑒別方法—新技術(shù)新方法—分子生物學(xué)方法1

   
   （1）DNA堿基比 
    DNA堿基比［（G+C）mol %］，以G+C物質(zhì)的量分數（mol %）表示： 
        （G+C）mol %=（G+C）/（A+T+G+C）%
    該比值的變化范圍很大，原核生物變化范圍是20—78%，真核生物的變化范圍為30%—60%。 
    目前已經(jīng)測定了大量生物的DNA堿基組成，從中可以發(fā)現一些帶有規律性的結論：①親緣關(guān)系密切而表型又高度相似的微生物應該具有相似的DNA堿基比；不同微生物之間的 DNA堿基比差別很大，則表明它們之間親緣關(guān)系疏遠。②DNA 堿基比相同或相似的微生物并不一定表明它們之間的親緣關(guān)系就一定相近，這是因為DNA堿基比只是指DNA中4種堿基的含量，并未反映出堿基在DNA分子中的排列順序。③一般認為，DNA堿基比相差超過(guò)5%就不可能是屬于同一個(gè)種，DNA堿基比相差超過(guò)10%可考慮是不同屬。 
   DNA堿基比可用化學(xué)方法或物理方法測定。由于化學(xué)方法比較費時(shí)，而且誤差也較大，因此目前比較常用物理方法進(jìn)行測定，尤其是熱變性溫度法。該法操作比較簡(jiǎn)便，重復性較穩定，常被作為首選而采用。該法是用紫外分光光度計測定DNA的熔解溫度（Tm）。它的基本原理是：首先將DNA溶于一定離子強度的溶液中，然后加熱。當溫度升到一定的數值時(shí)，兩條核苷酸單鏈之間的氫鍵開(kāi)始逐漸被打開(kāi)（DNA開(kāi)始變性）分離，從而使DNA溶液365紫外吸收明顯增加；當溫度高達一定值時(shí)，DNA完全分離成單鏈，此后繼續升溫，DNA溶液的紫外吸收也不再增加。DNA的熱變性過(guò)程（即增色效應的出現）是在一個(gè)狹窄的溫度范圍內發(fā)生的，紫外吸收增加的中點(diǎn)值所對應的溫度稱(chēng)為該DNA的熱變性溫度或熔解溫度。在DNA     分子中，GC堿基對之間有3個(gè)氫鍵，而AT堿基對只有2個(gè)氫鍵。因此，若細菌的DNA分子G+C含量高，其雙鏈的結合就比較牢固，使其分離成單鏈則需較高的溫度。在一定離子濃度和一定pH的鹽溶液中，DNA的Tm值與DNA的G+C含量成正比。因此，只要用紫外分光光度計測出一種DNA分子的Tm值，就可以計算出該DNA的G+C含量。 

 

上一篇：微生物鑒別方法—新技術(shù)新方法1

下一篇：微生物鑒別方法—新技術(shù)新方法—分子生物學(xué)方法2，1