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一、實(shí)驗簡(jiǎn)介
碳源同化試驗和糖類(lèi)發(fā)酵試驗是鑒定酵母菌類(lèi)常用的方法，在碳源充足的條件下，酵母菌會(huì )將糖類(lèi)氧化分解為二氧化碳和水（部分酵母會(huì )在無(wú)氧環(huán)境下特定糖類(lèi)分解為酒精和二氧化碳）提供能量快速生長(cháng)，即為糖發(fā)酵。而在碳源不足的情況下，一些酵母菌則可以利用糖類(lèi)合成自身所需的其他營(yíng)養物質(zhì)，即為碳源同化。一般來(lái)說(shuō)，真菌能夠發(fā)酵的糖類(lèi)物質(zhì)，也能夠同化利用，但是能同化利用的，卻不一定能發(fā)酵。通過(guò)使用碳源短缺的YNB培養基加入相應的糖，然后接種酵母菌進(jìn)行培養，可通過(guò)酵母菌是否能生長(cháng)判斷該酵母菌是否能夠同化利用某種糖。
二、YNB成分（g/L）
|
硫酸銨 |
5.0 |
|
L-組氨酸鹽酸鹽 |
0.01 |
|
DL-蛋氨酸 |
0.02 |
|
DL-色氨酸 |
0.02 |
|
生物素 |
0.000002 |
|
泛酸鈣 |
0.0004 |
|
葉酸 |
0.000002 |
|
肌醇 |
0.002 |
|
煙酸 |
0.0004 |
|
對氨基苯甲酸 |
0.0002 |
|
鹽酸吡哆醇 |
0.0004 |
|
核黃素 |
0.0002 |
|
鹽酸硫胺素 |
0.0004 |
|
硼酸 |
0.0005 |
|
硫酸銅 |
0.00004 |
|
碘化鉀 |
0.0001 |
|
氯化鐵 |
0.0002 |
|
硫酸錳 |
0.0004 |
|
鉬酸鈉 |
0.0002 |
|
硫酸鋅 |
0.0004 |
|
磷酸二氫鉀 |
1.0 |
|
硫酸鎂 |
0.5 |
|
氯化鈉 |
0.1 |
|
氯化鈣 |
0.1 |
|
pH |
5.4±0.2 |
三、實(shí)驗方法
培養基的配制：稱(chēng)取YNB培養基6.7g，另取5g糖，加入至100mL無(wú)菌水中，制成10倍濃度的溶液，用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌，取0.5mL的10倍濃度溶液，加入至裝有4.5mL的無(wú)菌水試管中，振蕩均勻后使用。
接種及培養：挑取平板上的純菌落加入至無(wú)菌生理鹽水中振蕩均勻，制成約106-107CFU/mL的菌懸液，吸取50-100μL的菌懸液接種至試管中，25℃培養3-7天，記錄生長(cháng)情況。
注：不同的酵母對不同的糖類(lèi)同化能力存在差異，有時(shí)需持續觀(guān)察1-4周，能在1周或兩周內出現明顯渾濁生長(cháng)，為強同化；在兩周內無(wú)明顯生長(cháng)，超過(guò)兩周后迅速生長(cháng)渾濁，為延滯同化；兩周后緩慢變渾濁，為緩慢同化；渾濁程度較低為弱同化；不渾濁為不同化。
四、生長(cháng)現象及結果觀(guān)察
接種白色念珠菌至YNB培養基中，25℃需氧培養3-5d。
|
測試菌株 |
菌株編號 |
碳源 |
生長(cháng)現象 |
|
白色念珠菌 |
CMCC98001 |
葡萄糖 |
陽(yáng)性，渾濁 |
|
白色念珠菌 |
CMCC98001 |
乳糖 |
陰性，不生長(cháng) |
|
白色念珠菌 |
CMCC98001 |
半乳糖 |
陽(yáng)性，渾濁 |
|
白色念珠菌 |
CMCC98001 |
木糖 |
陽(yáng)性，渾濁 |
圖1 白色念珠菌碳源同化試驗（從左至右分別為葡萄糖、乳糖、半乳糖、木糖）
相關(guān)產(chǎn)品：
注:本文屬海博生物原創(chuàng ),未經(jīng)允許不得轉載。
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