一、檢驗原理:
大腸菌群(Coliforms)是指在一定培養條件下能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌。一般認為該菌群細菌主要包括腸桿菌科中埃希氏菌屬、檸檬酸桿菌屬、克雷伯氏菌屬和腸桿菌屬。大腸菌群都是直接或間接地來(lái)自人和溫血動(dòng)物的糞便。所以食品中檢出大腸菌群就表示食品受人、溫血動(dòng)物的糞便污染。
該培養基用于大腸菌群的固體平板檢測。蛋白胨提供微生物生長(cháng)所需的碳源、氮源、維生素和生長(cháng)因子;乳糖為可發(fā)酵的糖類(lèi);去氧膽酸鈉和檸檬酸鐵銨可抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(cháng);磷酸氫二鉀為培養基pH緩沖劑;中性紅為pH指示劑,發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸的細菌菌落為紅色,不發(fā)酵乳糖的細菌為無(wú)色;氯化鈉維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養基的凝固劑。大腸菌群在固體培養基中發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸,在指示劑中性紅的作用下形成可計數的紅色,帶有或不帶有沉淀環(huán)的菌落。
二、培養基配方(g/L):
蛋白胨 |
10.0 |
乳糖 |
10.0 |
去氧膽酸鈉 |
1.0 |
磷酸氫二鉀 |
2.0 |
檸檬酸鐵銨 |
2.0 |
中性紅 |
0.033 |
氯化鈉 |
5.0 |
瓊脂 |
15.0 |
pH值7.3±0.1(25℃) |
三、試驗方法:
1. 稱(chēng)取本品45.0 g,加入1000 mL純化水中,加熱溶解并不停攪拌,煮沸1分鐘,冷卻至45℃-50℃左右時(shí),傾入無(wú)菌平皿,備用。無(wú)需高壓滅菌。
2. 10倍梯度稀釋法制備質(zhì)控菌株菌懸液,吸取適宜梯度的菌懸液接種于待測培養基和參比培養基(HB0177-8胰蛋白胨大豆瓊脂(TSA))。
3. 放置于恒溫培養箱36℃±1℃需氧培養18 h-24 h,觀(guān)察試驗結果。
四、試驗結果判斷:
接種以下質(zhì)控菌株,放置36℃±1℃需氧培養18 h-24 h,試驗結果如圖1所示。
質(zhì)控菌株 |
菌株編號 |
接種量 (CFU) |
回收率 |
生長(cháng)情況 |
其他特征 |
大腸埃希氏菌 |
ATCC 25922 |
10-100 |
≥70% |
+++ |
紅色菌落,可有膽酸沉淀環(huán) |
弗氏檸檬酸桿菌 |
ATCC 43864 |
10-100 |
≥70% |
+++ |
紅色菌落,可有膽酸沉淀環(huán) |
陰溝腸桿菌 |
ATCC 23355 |
10-100 |
≥70% |
+++ |
紅色菌落,可有膽酸沉淀環(huán) |
鼠傷寒沙門(mén)氏菌 |
ATCC 14028 |
10-100 |
≥70% |
+++ |
無(wú)色至淡黃色透明菌落 |
金黃色葡萄球菌 |
ATCC 25923 |
100-1000 |
/ |
- |
抑制 |
圖1 質(zhì)控菌株在大腸菌群培養基(日本)上的生長(cháng)情況
相關(guān)產(chǎn)品:
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