1.使用Fraser培養基代替李氏增菌肉湯
新版標準使用的Fraser肉湯是參考了ISO 11290標準的檢驗方法,相比較與上一版本的李氏增菌肉湯,Fraser肉湯中吖啶黃素的濃度稍低一點(diǎn),李斯特氏菌生長(cháng)速度會(huì )更快一些,提高了檢出限,Fraser肉湯中同時(shí)含有七葉苷和檸檬酸鐵銨具有指示能力,李斯特氏菌大量繁殖時(shí)可以觀(guān)察到培養基變黑的反應,而李氏增菌肉湯中不含鐵鹽,外觀(guān)上無(wú)明顯特征。
2.李斯特氏菌顯色培養基配方的加入
之前版本的標準中雖然在檢驗過(guò)程中需要用到李斯特氏菌顯色培養基,但并未寫(xiě)配方,使用者通常只能選擇購買(mǎi)商品化的培養基。此次更新加入的李斯特氏菌顯色培養基配方也是參考了ISO 11290標準中的配方做了公開(kāi),使用者也可選擇自行購買(mǎi)原材料配制培養基。同時(shí)還詳細寫(xiě)出了李斯特氏菌在顯色培養基上的特征表現,供檢驗者做為參考使用。
3.分離鑒定
上一版標準在初篩一步是從選擇性平板上挑取菌落直接鑒定,這個(gè)操作有一定風(fēng)險,一方面是因為選擇性培養基上的成分有可能對生化鑒定結果產(chǎn)生影響,一方面是有可能挑取到的菌落不純,得到錯誤的鑒定結果。而新標準中則是先要求挑取典型或可疑菌落接種至TSA-YE平板或羊血平板進(jìn)行純化,再挑取非選擇性平板上的菌落進(jìn)行鑒定,相對更為合理。而生化反應的項目跟之前沒(méi)有變化(檢驗流程圖中的氧化酶實(shí)驗是刊誤,應為過(guò)氧化氫酶試驗),動(dòng)力試驗的描述則更為詳細了。
注:新標準在生化鑒定表1下方增加了兩條細節描述,第一條描述為“部分單核細胞增生李斯特氏菌不溶血,個(gè)別單核細胞增生李斯特氏菌血清型不能發(fā)酵鼠李糖”,第二條備注為“-代表90%-100%的菌株陰性,+代表90%-100%的菌株陽(yáng)性”,這意味著(zhù)實(shí)際檢驗中有幾率碰見(jiàn)生化異常的單增李斯特氏菌,按照標準中規定的生化鑒定操作并不能完全相符。
4.平板計數法的更改
使用磷酸鹽緩沖液和無(wú)添加劑的Fraser肉湯代替了原來(lái)的緩沖蛋白胨水和李氏增菌肉湯,對檢驗結果無(wú)明顯改變,但磷酸鹽緩沖液相比較于緩沖蛋白胨水,成本更低一些。
在接種方式上,李斯特氏菌含量高的樣品使用0.1mL的稀釋液直接涂平板,含量低的樣品涂平板方式與之前標準相同,這樣在某些情況下也是減少了李斯特氏菌顯色平板的用量,節省了成本(顯色培養基價(jià)格通常都是遠高于一般的培養基。)
5.結果報告
新標準中詳細描述了對于檢驗結果報告的方式,增加了數值修約原則,更通俗易懂。
6.其他培養基的更改
Palcam瓊脂的添加劑配方上一版存在錯誤,新版本已進(jìn)行了更正,其他有部分培養基的成分描述或pH稍有改變,不影響檢驗結果。
注:本文屬海博生物原創(chuàng ),未經(jīng)允許不得轉載。
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