2025版GB4789.38大腸埃希氏菌檢驗標準更新解讀

1.大腸埃希氏菌術(shù)語(yǔ)和定義的描述更改

舊版本的標準中大腸埃希氏菌描述為IMViC（靛基質(zhì)、甲基紅、VP、檸檬酸鹽利用）試驗為“++--”或“-+--”，新標準則改成了“具有β-葡萄糖醛酸苷酶活性，能分解5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖醛酸苷，在胰蛋白胨膽鹽X-葡萄糖醛酸苷(Tryptone BileX- glucuronide，TBX)瓊脂上形成藍綠色菌落，”這樣更改的目的也是后面鑒定方法的更改。相比較于IMViC試驗，新標準以是否含β-葡萄糖醛酸苷酶做為鑒定依據，在試驗操作上更為簡(jiǎn)單明了。但需注意新標準在檢驗原理上的備注描述：“絕大多數大腸埃希氏菌具有β-葡萄糖醛酸苷酶活性，但大腸埃希氏菌O157等菌株沒(méi)有β-葡萄糖醛酸苷酶活性。另外，腸桿菌科內一些志賀氏菌、沙門(mén)氏菌等菌株也具有β-葡萄糖醛酸苷酶活性”，這代表實(shí)際檢驗中有漏檢的可能，一些致病性大腸埃希氏菌因不含β-葡萄糖醛酸苷酶，在TBX培養基上不會(huì )有顯色反應。還有少數沙門(mén)和志賀氏菌等菌株有β-葡萄糖醛酸苷酶，在TBX上則會(huì )出現與大腸桿菌相同的藍綠色菌落，但這些菌在EC肉湯中44.5℃培養通常不會(huì )有產(chǎn)氣現象，因此一般不會(huì )干擾最終結果。

2.LST和EC肉湯培養時(shí)間更改

舊標準中培養時(shí)間為48小時(shí)，新標準改為了24-48h，意味著(zhù)在24h時(shí)如果觀(guān)察到了產(chǎn)氣的結果即可進(jìn)行下一步，出現陽(yáng)性結果可以縮短檢驗周期。

3.鑒定方法改變

舊標準中在EC肉湯出現產(chǎn)氣結果后，需先轉接EMB平板，再使用營(yíng)養瓊脂純化，然后再做IMViC生化和革蘭氏染色鑒定，需要3天時(shí)間，且項目繁瑣。新標準則直接劃線(xiàn)TBX平板進(jìn)行鑒定，又簡(jiǎn)單又省時(shí)間。

4.MPN計數法貝類(lèi)產(chǎn)品方法改變及附錄C的增加

新標準中對于貝類(lèi)產(chǎn)品的MPN法檢驗由每個(gè)稀釋度接種3管改為了接種5管，總共需接種15管（其他樣品一般是接種9管），提高了靈敏度和準確度，同時(shí)新增了附錄C供貝類(lèi)產(chǎn)品的檢驗結果查找。

5.TBX瓊脂替換VRBA-MUG平板

在原理上，TBX瓊脂和VRBA-MUG培養基是相同的，都是利用了大腸埃希氏菌含有的β-葡萄糖醛酸苷酶特異性分解底物產(chǎn)生特征性反應。但在實(shí)際使用中，VRBA-MUG則需借助紫外燈觀(guān)察熒光反應，有時(shí)候一些樣品也會(huì )有熒光反應，或者菌落混雜導致熒光現象不清晰，計數比較困難。而TBX瓊脂在使用上則更為方便，不需要借助紫外燈，樣品一般不會(huì )造成干擾，可直接計數藍綠色菌落。

6.結果計算和報告

 舊標準選擇“10-100CFU”菌數的平板，新標準則改成了15-150CFU菌數的平板，相對結果更為準確，在進(jìn)行結果報告時(shí)，增加了更詳細的說(shuō)明，便于計算和報告。

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