幽門(mén)螺旋桿菌是一種革蘭氏陰性桿菌,螺旋形、微需氧、對生長(cháng)條件要求十分苛刻。以下將從培養基、培養時(shí)間、氣體條件、培養濕度溫度等幾方面進(jìn)行介紹。
1、常用培養基:布氏瓊脂(Brucella agar)或腦心浸液瓊脂(Brain Heart Infusion agar)。
(1)需添加營(yíng)養成分:需加入5-10%的脫纖維羊血或馬血,提供必要的生長(cháng)因子。
(2)可添加抑菌劑:為抑制雜菌,可加入萬(wàn)古霉素、兩性霉素B等抗生素。
(3)海博培養基推薦:HB8646 幽門(mén)螺旋桿菌固體培養基。
2、氣體環(huán)境
培養幽門(mén)螺旋桿菌最重要的是提供合適的氣體環(huán)境,幽門(mén)螺旋桿菌為微需氧培養基,菌需要5-10%的氧氣、5-10%的二氧化碳和80-90%的氮氣,培養時(shí)需要保持微需氧環(huán)境的穩定,可使用氣體培養箱進(jìn)行培養。
3、培養溫濕度
(1)溫度:37°C,接近人體體溫
(2)濕度要求:培養環(huán)境需保持高濕度,通常在95%以上。
4、培養時(shí)間
通常需要3-5天,有時(shí)延長(cháng)至7天。
5、pH值
培養基的pH應保持在6.0-7.0之間,有利于幽門(mén)螺旋桿菌的生長(cháng)。
6、接種與培養
(1)樣本處理:胃黏膜活檢樣本需盡快接種,避免暴露于空氣過(guò)久。
(2)接種方法:樣本研磨后均勻涂布于培養基表面。
(3)培養時(shí)間:3-7天,幽門(mén)螺桿菌生長(cháng)較慢。
7、生化特性:
(1)尿素酶陽(yáng)性
原理:幽門(mén)螺桿菌能夠分泌大量的尿素酶,將尿素分解為氨和二氧化碳。產(chǎn)生的氨可以中和胃酸,在細菌周?chē)纬晌h(huán)境,保護細菌免受胃酸的侵蝕。
(2)氧化酶和過(guò)氧化氫酶試驗陽(yáng)性
原理:幽門(mén)螺桿菌具有氧化酶活性,能夠氧化細胞色素c。含有過(guò)氧化氫酶能夠分解過(guò)氧化氫(H₂O₂)為水和氧氣。
8、生理特性
(1)耐酸性:能夠在強酸環(huán)境中生存,主要通過(guò)分泌尿素酶分解尿素產(chǎn)生氨,中和胃酸,除了尿素酶產(chǎn)生的氨中和胃酸外,幽門(mén)螺桿菌還具有其他耐酸機制,如質(zhì)子泵和酸休克蛋白。這些機制使細菌能夠在強酸環(huán)境中生存和繁殖。
(2)形態(tài)觀(guān)察:革蘭氏染色呈陰性,螺旋狀或彎曲桿狀。
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