配制用水溫度對2216E液體培養基滅菌后沉淀量的影響

一、培養基簡(jiǎn)介：

  該培養基用于海生細菌的增菌培養，由蛋白胨、酵母粉、檸檬酸鐵、氯化鈉、氯化鎂、硫酸鈉、氯化鈣、氯化鉀、碳酸鈉、溴化鉀、氯化鍶、硼酸、硅酸鈉、氟化鈉、硝酸銨和磷酸氫二鈉組成。

  培養基含有較為豐富的無(wú)機鹽成分，在加熱和滅菌的過(guò)程中很容易發(fā)生反應形成沉淀，是由于培養基中Ca²⁺、Mg²⁺、Fe³⁺等陽(yáng)性離子與培養基中的可溶性磷酸鹽共熱沉淀，但不影響使用。建議配制培養基時(shí)使用去離子水、蒸餾水、純化水，切勿使用普通自來(lái)水，引入更多的離子。在配制時(shí)，溶解培養基的水的溫度對滅菌后沉淀的量也有很大影響。

  本次試驗驗證熱水和冷水溶解培養基干粉對滅菌后沉淀量的影響。

二、試驗方法：

  1. 熱水溶解：量取純化水至搪瓷缸中，加熱煮沸，稍冷后，再將熱水倒入燒杯（含磁力攪拌子）中，放置于磁力攪拌器上攪拌，緩慢加入干粉培養基，攪拌30min，再分裝至試管（裝量10mL）、三角瓶（裝量200mL和裝量400mL），高壓滅菌，觀(guān)察滅菌前后溶液的澄清度和沉淀物質(zhì)的量。

  2. 冷水溶解：量取純化水至燒杯（含磁力攪拌子）中，放置于磁力攪拌器上攪拌，緩慢加入干粉培養基，后續步驟同上。

三、試驗結果：

  1. 滅菌前比較：攪拌溶解后發(fā)現，兩種溫度的水配制的培養基液體都是渾濁不澄清的，但熱水培養基較冷水培養基偏渾濁，如圖1所示。

圖1 滅菌前熱水和冷水溶解培養基的狀態(tài)（裝量從左到右分別是：400mL、200mL、10mL）

注：1-1：熱水溶解；1-2：冷水溶解

  2. 滅菌后比較：兩種溫度的水配制的培養基在試管底部和三角瓶底部均有一層沉淀，仔細看的話(huà)是熱水溶解的培養基底部沉淀相對多一些，結果如圖2所示。

圖2 滅菌后不同裝量培養基的狀態(tài)（左：熱水，右：冷水）

注：2-1：400mL裝量；2-2：200mL裝量；2-3：10mL裝量

四、配制含無(wú)機鹽成分較多培養基的注意事項

  1. 在配制含無(wú)機鹽成分較多的培養基時(shí)，應使用冷水溶解干粉，且應先加水再緩慢倒入干粉培養基，充分攪拌溶解，可以使用磁力攪拌器進(jìn)行攪拌。

  2. 確保配制和分裝培養基的容器清潔，避免雜質(zhì)殘留。

  3. 滅菌結束后盡快取出培養基，避免燜鍋現象。

  4. 避免自行調節培養基pH值或者添加額外的營(yíng)養成分，這些操作可能會(huì )導致離子之間發(fā)生復雜的化學(xué)反應，從而使培養基突然出現大量沉淀。

  5. 培養基滅菌后出現沉淀的原因可參考往期原創(chuàng )文章：培養基為什么會(huì )出現沉淀。

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