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一、簡(jiǎn)述
對于樣品中的微生物計數測定，通常采用兩種方法，涂布法和傾注法�！巴坎肌弊畛跏且粋�(gè)工業(yè)用語(yǔ)，是為了防腐、絕緣、裝飾等目的，以液體或粉末形式在織物，紙張，金屬箔或板等物體表面上涂蓋薄層的操作。
在微生物計數接種時(shí)，借鑒了這種說(shuō)法，簡(jiǎn)單說(shuō)就是將含有微生物的樣品液，滴加于培養基平板上，迅速用涂布棒在表面作來(lái)回左右的涂抹，讓菌液均勻擴散分布，培養后就可長(cháng)出單個(gè)的微生物的菌落。具體操作方法可參考：涂布平板法。
對于涂布的工具——涂布棒，目前市面上有各種涂布棒，從材質(zhì)上看有不銹鋼的、玻璃的、塑料的，從形狀上分有三角形、L行、T型，大小粗細各種各樣（圖1）。有關(guān)涂布棒的制作方式可參考：一種簡(jiǎn)易好用的涂布棒制作方法。
圖1 各種各樣的涂布棒
（從左到右依次為：不銹鋼、玻璃、塑料）
不同的涂布棒對涂布計數的結果有沒(méi)有影響？是不是每涂一個(gè)板，必須要更換涂布棒？本文著(zhù)重以具體試驗的形式具體說(shuō)明，以期為廣大實(shí)驗操作人員提供借鑒。
二、試驗設置
分別采用三種涂布棒共設5組試驗，每組各設10個(gè)培養基平板，滴加相同濃度相同體積的菌液，A1、A2、A3所用涂布棒為采血管自制，B涂布棒為玻璃棒制作，C涂布棒為一次性塑料成品，每組具體操作時(shí)，A1組10個(gè)板，共用一個(gè)涂布棒，A2組每涂一個(gè)板更換一個(gè)涂布棒，A3組不用涂布棒，將菌液分散到平板上，傾斜攤勻即可；B組使用玻璃棒，每?jì)蓚�(gè)平板更換一個(gè)涂布棒；C組10個(gè)板共用一個(gè)涂布棒。
表1 試驗方案設置表
|
組別 |
涂布棒更換方式 |
|
|
A（采血管自制） |
A1 |
不更換 |
|
A2 |
每板更換一個(gè) |
|
|
A3 |
不用涂布棒，直接滴勻 |
|
|
B（玻璃棒制作） |
每?jì)砂鍝Q一個(gè) |
|
|
C（塑料成品） |
不更換 |
|
三、試驗結果及分析
從表2、圖2看出，A1、A2、B、C平均數均為28CFU-29CFU，各組間無(wú)明顯差別，A3平均數最高，且有菌數最高值37，由此可以判斷，不用涂布棒的情況下，測定的菌數最能反應樣品中的菌數真實(shí)值，如果能夠明確把握每100μL樣品中的菌數小于200CFU，可以不用涂布棒，采用直接滴勻的方式進(jìn)行接種；涂布棒的材質(zhì)、大小和更換頻率，對測得的菌數多少無(wú)明顯影響，只要能保證菌液涂勻即可。
表2 不同涂布方案的計數結果
|
組別 |
重復及平板編號 |
平均 |
|||||||||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
||
|
A1 |
27 |
31 |
30 |
26 |
25 |
29 |
30 |
30 |
27 |
28 |
28.3 |
|
A2 |
27 |
34 |
19 |
33 |
33 |
36 |
29 |
28 |
23 |
28 |
29 |
|
A3 |
37 |
32 |
34 |
29 |
24 |
34 |
34 |
33 |
27 |
28 |
31.2 |
|
B |
24 |
36 |
25 |
31 |
35 |
27 |
32 |
33 |
26 |
25 |
29.4 |
|
C |
29 |
26 |
29 |
35 |
31 |
20 |
32 |
33 |
29 |
20 |
28.4 |
圖2 不同試驗方案的計數結果
四、結論與討論
（1）不用涂布棒的情況下，測定的菌數最能反應樣品中的菌數真實(shí)值，可能的情況下，應首選這種方式進(jìn)行接菌；
（2）如果樣品中菌數比較多，為了防止涂布不均勻，盡量使用涂布棒進(jìn)行涂布，涂布棒的材質(zhì)、大小和更換頻率，對測得的菌數多少無(wú)明顯影響，只要能保證將菌液涂勻即可；
（3）每個(gè)稀釋度至少用一個(gè)涂布棒，更換稀釋度時(shí)需更換不同的涂布棒，在由低濃度向高濃度涂抹時(shí)，也可以不更換涂布棒�！�1】
五、注意事項
（1）滴加菌液前，要將平板在無(wú)菌環(huán)境下吹風(fēng)干燥，去除平板表面的水分；
（2）涂布時(shí)，用涂布棒將菌液自平板中央均勻向四周涂布擴散，切忌用力過(guò)猛將菌液直接推向平板邊緣或將培養基劃破；
（3）涂布時(shí)要保持手法的穩定性和一致性，涂布速度要適中，避免過(guò)快導致微生物分布不均或過(guò)慢導致培養基干燥；
（4）重復實(shí)驗是確保實(shí)驗結果準確性的重要手段。通過(guò)在同一稀釋度下涂布多個(gè)平板并統計菌落數的平均值，能夠減小實(shí)驗誤差并提高數據可靠性。在重復實(shí)驗中，如果某個(gè)平板的菌落數與其他平板相差較大，說(shuō)明可能存在操作失誤，這時(shí)應該舍棄該數據，并找出原因進(jìn)行修正。
參考文獻：
【1】張敬慧,郭云霞主編.釀酒微生物 第2版[M].中國輕工業(yè)出版社.2021:321.
注：本文屬海博生物原創(chuàng )，未經(jīng)允許不得轉載。
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