常見(jiàn)問(wèn)題答疑（細菌的接種）

  本文挑選了部分客戶(hù)咨詢(xún)較多、反饋較多的問(wèn)題以問(wèn)答的形式進(jìn)行答疑。

  常見(jiàn)問(wèn)題一

  Q:為什么中國藥典要求接不大于100CFU的菌，在GB4789.28中對培養基的接種量也有要求？

  A：在中國藥典中的液體培養基和國標部分使用到液體的培養基的檢驗中，都要求接種量不大于100CFU（國標一般為10-100CFU）。一方面是可以檢驗該培養基靈敏度，若接種量為10CFU即可檢出目標菌，則檢樣中有1000CFU，10000CFU目標菌時(shí)，可以保證其被檢出。而若接種量1000CFU時(shí)才可檢出目標菌，那么檢樣中若有10CFU或100CFU目標菌時(shí)，能否檢出呢？這樣很可能造成檢樣出現假陰性。另一方面，當液體培養基接種量過(guò)大時(shí)，細菌生長(cháng)過(guò)快，聚集效應也較為明顯，很多反應不典型，也不利于檢驗人員通過(guò)培養基的產(chǎn)氣、變色等現象進(jìn)行初步判斷。

  而在固體培養基上，接種菌量較多時(shí)，則會(huì )容易造成菌落之間成片生長(cháng)，貼壁生長(cháng)，造成菌落狀態(tài)不典型，難以計數等問(wèn)題。

  常見(jiàn)問(wèn)題二

  Q：請問(wèn)依據上一個(gè)問(wèn)題的考慮，是否接種量越小越好呢？

  A：并不是越小越好。當接菌量過(guò)少（如只有個(gè)位數的CFU菌量時(shí)），平行實(shí)驗的準確性會(huì )降低，因為菌很可能在液體中因菌體受損、衰老等原因在大量分裂之前就死亡。如果做了10個(gè)平行實(shí)驗，很可能會(huì )出現2-3根生長(cháng)，其余皆不生長(cháng)的情況。而對于固體培養基來(lái)說(shuō)，接菌量太少，對回收率計算時(shí)的影響很大，很可能菌落數量絕對值相差一兩個(gè)，回收率差了百分之十乃至更多，顯然是不合適的。

  常見(jiàn)問(wèn)題三

  Q：如何確定自己到底接了多少菌進(jìn)培養基？當需要接高濃度菌時(shí)，我應該如何確定濃度？按照麥氏比濁的方式稀釋了菌最后計數卻相差較大，大概是什么原因？
  A：在接菌時(shí)，可以同時(shí)接種TSA培養基（真菌一般接種SDA培養基，部分細菌或真菌需要接種一些特殊的培養基）同條件進(jìn)行培養，最后計數TSA培養基上的菌落數，即可算出我們接了多少CFU的菌進(jìn)入培養基。

  當做定性試驗時(shí)，很多客戶(hù)不太確定什么樣的濃度才是1*10⁸CFU,若確實(shí)相關(guān)經(jīng)驗較少，此處推薦吸取菌液進(jìn)行梯度稀釋后，選擇合適梯度進(jìn)行涂布計數，最后反推菌液濃度是否合適。若標準注明了麥氏比濁度，也可根據濁度進(jìn)行參比。

  但是麥氏比濁也并不是非常穩定的方式，同樣受到菌的種類(lèi)、活性的影響，因此應盡量采用新鮮的工作菌株進(jìn)行操作。

注：本文屬海博生物原創(chuàng )，未經(jīng)允許不得轉載。

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