培養基高壓蒸汽滅菌失敗常見(jiàn)原因分析

一、高壓蒸汽滅菌簡(jiǎn)介

  高壓蒸汽滅菌是實(shí)驗室常用的滅菌手段之一，常用于培養基、各種容器及敞開(kāi)式器皿等物品的滅菌。大多數培養基采用的滅菌條件是121℃滅菌15min，準確來(lái)說(shuō)，是培養基達到至少121℃，維持至少15min，可以達到較為理想的滅菌效果，滅菌溫度越高，滅菌時(shí)間越長(cháng)，滅菌失敗的概率就越小，但同時(shí)要考慮培養基的性能問(wèn)題，因此在對滅菌程序驗證時(shí)，需同時(shí)兼顧滅菌效果與培養基性能兩方面進(jìn)行確定。

二、影響滅菌效果的因素

  對于絕大多數微生物包括芽孢體在內，在121℃滅菌8分鐘條件下存活的概率不超過(guò)百萬(wàn)分之一，我們平常使用的121℃滅菌15分鐘也是一種過(guò)度滅菌的方式了，因為實(shí)際情況比較復雜，影響滅菌條件的因素較多，即使如此，仍然會(huì )遇到滅菌失敗的情況出現。

  （1）熱穿透：前面已經(jīng)說(shuō)過(guò)，121℃滅菌15min嚴格來(lái)說(shuō)應該是培養達到這個(gè)溫度所持續的時(shí)間，而不是滅菌鍋達到這個(gè)溫度維持的時(shí)間，但市場(chǎng)上的滅菌鍋基本上都是以滅菌鍋的腔體溫度達到121℃維持15min計算的，這樣就存在一個(gè)問(wèn)題，滅菌鍋腔體溫度到了121℃，但是培養基的溫度沒(méi)有達到121℃，或者培養基的溫度遲緩到了121℃，但只維持了5分鐘或10分鐘，造成滅菌失敗，也就是熱穿透不夠。鍋內冷空氣未排凈、鍋內擺放過(guò)滿(mǎn)、滅菌體積過(guò)大、滅菌容器不透氣等因素都會(huì )顯著(zhù)降低熱穿透效果。

  （2）腔體內溫度分布：滅菌鍋本身由于質(zhì)量問(wèn)題的原因，國內可能存在溫度不均一的問(wèn)題，或者溫度不達標的現象。滅菌鍋在使用前，通常需要進(jìn)行空載、半載、滿(mǎn)載對內部各點(diǎn)位溫度進(jìn)行檢定，以確認滅菌鍋是否能達到良好的滅菌效果。

  （3）培養基的體積和初始溫度：許多人習慣于將培養基直接加水溶解就拿去滅菌了，其實(shí)這是不對的，市場(chǎng)上售賣(mài)的大多數需要高壓蒸汽滅菌的培養基的配制方法上都會(huì )寫(xiě)“加熱溶解”或“加熱煮沸”等信息，除了能讓培養基快速溶解分布均勻以外，還可以使培養基初始溫度提高，在滅菌鍋里面可以更容易達到相應的滅菌溫度。特別是配制體積比較大時(shí)，培養基升溫更慢，更容易造成滅菌失敗。

  （4）微生物負載：毫無(wú)疑問(wèn)，滅菌前的培養基中微生物含量越少，耐熱芽孢菌越少，越容易滅菌成功。很多時(shí)候你滅菌沒(méi)有失敗，并不是你的滅菌過(guò)程沒(méi)有問(wèn)題，而是培養基中耐熱的微生物負載太低了。事實(shí)上如果培養基真正能達到121℃維持15min，培養基中耐熱微生物數量即使再高也沒(méi)有用。我們經(jīng)常使用的生物滅菌指示，含有百萬(wàn)個(gè)數量級別耐熱能力最強之一的嗜熱脂肪芽孢桿菌的芽孢體，在121℃滅菌15min都能輕易被全部殺死，更何況是培養基中有限的菌。而在培養基滅菌過(guò)程中熱穿透不夠的情況下，耐熱菌負載的高低就很容易影響滅菌效果。

三、減少高壓蒸汽滅菌失敗的措施

  以上分析可以得出，造成滅菌失敗的原因，主要是各種細節導致熱穿透不足，造成滅菌失敗。

  （1）滅菌的驗證：對滅菌鍋的溫度分布、滅菌效果做初步驗證，確認設備本身沒(méi)有問(wèn)題；

  （2）冷空氣的排除：現在使用的滅菌鍋大多數為自動(dòng)排氣的，一般不需要手動(dòng)排氣。對于一些老式的滅菌鍋，需要手動(dòng)排凈鍋內的冷空氣，再關(guān)閉放氣閥升溫。

  （3）滅菌鍋的負載：避免滅菌鍋內的物品擺放過(guò)滿(mǎn)或擺放過(guò)于密集，留有一定的空間和間距更容易滅菌成功。

  （4）容器的透氣性：高壓蒸汽滅菌鍋通常需要容器內的空氣與滅菌鍋內氣體聯(lián)通，但如果容器自身處于密閉狀態(tài)，與滅菌鍋內空氣不流通，熱量更難穿透，特別是體積大的情況下更容易滅菌失敗，還有可能造成爆瓶現象，可以嘗試使用水浴滅菌鍋。

  （5）培養基的配制和體積：滅菌前對培養基進(jìn)行加熱煮沸溶解，對于大體積容器可分裝至小瓶，一般的實(shí)驗室滅菌鍋建議滅菌培養基體積控制在500mL以下，最高不超過(guò)1L，更有利于培養基滅菌過(guò)程的快速升溫。

注：本文屬海博生物原創(chuàng )，未經(jīng)允許不得轉載。

上一篇：培養基過(guò)濾除菌失敗原因分析及改進(jìn)措施

下一篇：沒(méi)有了！