培養基過(guò)濾除菌失敗原因分析及改進(jìn)措施

  對于一些含有不耐熱成分的培養基或者添加成分（如部分抗生素等），經(jīng)常采用過(guò)濾除菌的方式。某些情況下，許多液體培養基也能采用過(guò)濾除菌的方式使用，相比較與高壓蒸汽滅菌，過(guò)濾除菌可以更好的保留培養基的營(yíng)養成分完整性，防止糖類(lèi)等成分出現焦化，可以獲得更好的使用效果，特別是在模擬灌裝試驗中，應用非常廣泛。由于過(guò)濾除菌的工藝僅僅是通過(guò)濾膜阻攔細菌而不是殺死細菌，因此比高壓蒸汽滅菌失敗的風(fēng)險要高，對于樣品的要求、過(guò)程控制都是非常嚴格的。

  （1）水質(zhì)：通常情況下，配制培養基用水的微生物載量是比較低的，但是如果水中的微生物超標，特別是配制體積較大時(shí)，水中的微生物總量較多，也會(huì )導致過(guò)濾除菌工藝失敗。因此當水中微生物數量較多時(shí)，可以對培養基用水進(jìn)行初過(guò)濾或加熱等方式降低水中微生物數量，降低風(fēng)險。

  （2）設備管道：主要是在過(guò)濾前的設備和管道，若未進(jìn)行有效的消毒措施，很可能有微生物存活，導致過(guò)濾除菌失敗。過(guò)濾前的培養基容器及管道也應盡可能進(jìn)行滅菌處理。

  （3）培養基負載：培養基中的微生物初始污染數量對于過(guò)濾除菌效果的影響至關(guān)重要，特別是進(jìn)行模擬灌裝時(shí)，使用的TSB干粉最好是經(jīng)特定工藝處理的，能達到無(wú)菌或接近無(wú)菌效果最好，市場(chǎng)是售賣(mài)的TSB干粉一般是有菌的，這個(gè)培養基營(yíng)養高，微生物初始污染數量一般是比較高的水平，在過(guò)濾除菌之前，應對微生物初始污染數量進(jìn)行測試，盡可能采取措施減少菌數。

  （4）支原體污染：過(guò)濾除菌通常采用0.22μm的濾膜過(guò)濾除菌，支原體是可以通過(guò)這個(gè)濾膜的，特別是在TSB中，某些支原體可以通過(guò)濾膜并在TSB中生長(cháng)，造成污染，這也是做模擬灌裝使用TSB干粉要經(jīng)過(guò)特定工藝滅菌處理的原因，支原體很可能會(huì )存在于干粉當中，也有可能存在于環(huán)境、水、設備設施中。

 （5）過(guò)濾時(shí)長(cháng)及溫度：對于營(yíng)養類(lèi)培養基的過(guò)濾除菌，應盡快完成過(guò)濾的過(guò)程，特別是在室溫較高的情況下，培養基中少量的微生物也會(huì )很容易快速繁殖，達到較高的水平，造成過(guò)濾除菌失敗。因此配制好的培養基應快速完成過(guò)濾除菌，若過(guò)濾時(shí)間較長(cháng)，則必須將環(huán)境和培養基的溫度控制在較低水平，盡可能減緩微生物的繁殖速度。

  （6）設備及工藝：過(guò)濾過(guò)程受培養基體積、微生物初始污染數量、濾膜質(zhì)量等因素影響，可能出現濾膜穿孔現象，因此在過(guò)濾時(shí)，通�？梢圆捎枚嗉夁^(guò)濾方式，孔徑由大到小，降低過(guò)濾失敗的風(fēng)險。

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