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【原理】
醋酸纖維膜是由醋酸纖維素制成的均一薄膜，對分子移動(dòng)無(wú)阻力,是免疫球蛋白鑒定的一種簡(jiǎn)單快速的電泳方法。血清蛋白在一定的pH下都帶有電荷,由于各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)及分子量的不同,所帶的電荷也就各不相同,在直流電場(chǎng)的作用下,它們在醋酸纖維膜上泳動(dòng)的速度也不一樣,經(jīng)過(guò)一段時(shí)間泳動(dòng)后,即可彼此分開(kāi),形成電泳圖譜。
(一)巴比妥緩沖液(pH8.6,離子強度(μ)0.05)
【成分】
5.5二乙基巴比妥鈉
10.3g
5.5二乙基巴比妥酸
1.84g
蒸餾水
1000ml
【制法】
將以上兩種成分加入蒸餾水中,加熱溶解即可，
【用途】
蛋白電泳用。
(二)染色液
1.0.05%氨基黑染液
【成分】
氨基黑10B
0.5g
1mol 醋酸
500ml
0.1mol 酸酷鈉
500ml
【制法】
先將醋酸和醋酸鈉溶液混勻后,再加入氨基黑粉劑,待充分混勻溶解后,即可使用。
2.0.25%氨基黑染液
【成分】
氨基黑10B
1.0g
甲醇
200ml
冰醋酸
40ml
蒸餾水
160ml
【制法】
先將后3種成分混勻,然后再加入氨基黑混勻溶解后,即可使用。
【用途】
用于經(jīng)電泳后之醋酸纖維膜標本的染色。
(三)5%醋酸脫色液
【成分】
甲醇
90ml
醋酸
10ml
蒸餾水
100ml
【制法】
把以上3種成分混合搖勻后,即可使用。
【用途】
用于經(jīng)染色后之醋酸纖維膜電泳標本的脫色。
(四)透明液
【成分】
95%乙醇
7份
冰醋酸
3份
【制法】
將以上兩種成分混勻后,即可使用。
【用途】
用于“染過(guò)色的醋酸纖維膜電泳標本”的透明。
(五)蛋白洗脫液
【成分】
1N 氫氧化鈉
500ml
0.1N EDTA
50ml
蒸餾水
500ml
【制法】
將以上3種成分混勻后即可使用。
【用途】
用于洗脫醋酸纖維膜的蛋白帶。
注:此液用于洗脫氨基黑染色的蛋白帶,而麗春紅R或S染的蛋白帶則用0.4NNaOH 溶液。
(第二軍醫大學(xué)蔡燕剛、吳挹芳編 吳挹芳審)
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