聚乙二醇

【原理】

  聚乙二醇(Polyethylene Glycol,簡(jiǎn)稱(chēng) PEG)是融合劑,在它作用下,可使兩個(gè)細胞的突起間發(fā)生細胞膜融合，30分鐘后可見(jiàn)有2個(gè)或多個(gè)核的細胞，其使細胞融合的機理尚不完全清楚,有人認為PEG使細胞膜的脂類(lèi)分子的物理結構重排,容易打開(kāi)細胞膜,使細胞融合。PEG的分子量由500~6000,濃度從40%~60%均可使細胞融合，但融合效果不同。分子量太低,效果不佳;分子量太高,粘度大,不易操作。當PEG分子量為1000、濃度為50%時(shí)，融合率較高。

【成分】

【制法】

  50%(W/V)PEG配制:稱(chēng)取PEG1g，放入玻璃刻度離心管，115℃滅菌15分鐘，冷至50℃左右加入預熱(37℃)無(wú)牛血清的RPMI-1640 0.8ml,用NaHCO₃，調整至pH7.0左右。用RPMI-1640補足至總體積2ml。另一種配制方法是以GKN代替RPM-1640,將所選PEG與等體積GKN混合，沸水中加溫30分鐘或115℃滅菌15分鐘，其PH調節要根據酚紅顏色,或在滅菌通風(fēng)櫥內開(kāi)口放置一段時(shí)間或通入5%CO₂。

【用途】

  促進(jìn)細胞融合的作用。

【注意事項】

  1.不同牌號PEG,即使分子量相同,融合率也有明顯的差異。

  2.要選用高純度的、供氣相層析用的PEG

  3.PEG作用時(shí)的溫度,一般采用室溫或37℃。

  4.PEG作用時(shí),一般采用pH7.0左右,有人主張不調整pH,有人認為可調整至pH7.6~7.8,甚至到pH8.0~8.2。

  5.PEG作用的時(shí)間,一般主張2~3分鐘,過(guò)短效果不佳,過(guò)長(cháng)毒性大。

  6.如果加入5%二甲亞砜(DMSO)到PEG，可防止PEG加入過(guò)快而造成滲透壓過(guò)大的變化。

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