常見(jiàn)的細胞平衡鹽溶液介紹及選擇

一、常見(jiàn)的細胞平衡鹽溶液

  平衡鹽溶液（Balanced salt solution, BSS）是細胞學(xué)實(shí)驗中必不可少的試劑，常用于哺乳動(dòng)物細胞在體外環(huán)境時(shí)的短期維持，也可用作細胞沖洗液。BSS通常是無(wú)機鹽的組合或混合物，成分主要包括鈉、磷酸鈉、鉀、鈣、鎂和氯化物等。鉀和鈉調節滲透性和張力，而鈣和鎂可以保持細胞膜和內部結構的完整性，通過(guò)添加磷酸鹽和碳酸氫鹽，平衡鹽溶液還能平衡環(huán)境pH的波動(dòng)。有些BSS還會(huì )添加葡萄糖，為細胞提供能量。

  細胞培養的平衡鹽溶液包括：PB磷酸緩沖液（Phosphate buffer solution，PB）、PBS磷酸緩沖鹽溶液（Phosphate-buffered saline, PBS）、杜氏磷酸緩沖鹽溶液（Dulbecco's phosphate-buffered saline, DPBS）、Hank's平衡鹽溶液（Hank's balanced salt solution, HBSS）、Earle's平衡鹽溶液（Earle's balanced salt solution, EBSS）和格氏平衡鹽溶液（Geys balanced salt solution, GBSS）等。

  PB緩沖液通常由磷酸二氫鈉（NaH₂PO₄）和磷酸氫二鈉（Na₂HPO₄）配制而成，另外也有使用磷酸鉀鹽配制（即K₂HPO₄或KH₂PO₄），其配制方法和緩沖液能力與磷酸鈉緩沖液相同。PB緩沖液的緩沖pH值范圍非常廣泛，可配制各種pH值的酸性、堿性和中性緩沖液，通常在pH為5.7-8.0之間使用。PB緩沖溶液在化學(xué)反應、合成反應等化學(xué)領(lǐng)域中有廣泛應用，在部分抗體制劑中也有應用，但如果用其沖洗細胞，則可能會(huì )導致細胞低滲吸水，甚至脹破。

  PBS緩沖液具有與PB緩沖液相同的緩沖對：H₂PO_4-和HPO₄^2-，與PB緩沖液不同的是PBS添加了氯化鈉和氯化鉀來(lái)增加鹽離子濃度。PBS緩沖液通常在pH為7.2-7.4使用，具有鹽平衡、調節滲透壓和一定的pH緩沖作用。DPBS是生物學(xué)、生物化學(xué)研究中使用較廣泛的一種平衡鹽溶液，DPBS和PBS的成分相同，但DPBS的Na₂HPO₄與KH₂PO₄的添加量略小。另外一部分文獻將該PBS緩沖液寫(xiě)成D-PBS緩沖液，并強調是不含鈣、鎂離子的配方。DPBS主要用于胚胎學(xué)方面的研究，可作為胚胎、組織、細胞的漂洗液、凍存液和培養液�？筛鶕�需要在D-PBS中加入葡萄糖、丙酮酸鈉等，以維持培養物的基本營(yíng)養。

   Hank's平衡鹽溶液是生物學(xué)實(shí)驗中最常用的平衡鹽溶液，主要成分為NaCl，KCl，KH₂PO₄，Na₂HPO₄，NaHCO₄和葡萄糖，具有維持滲透壓、保持pH穩定、提供簡(jiǎn)單營(yíng)養等作用。HBSS可用于多種細胞培養應用，如漂洗組織塊、器官或細胞，運輸細胞或組織，稀釋細胞計數，以及配置其他試劑等。從成分上來(lái)說(shuō)，Hank's緩沖液與D-Hank's緩沖液的一個(gè)主要區別在于D-Hank's緩沖液不含有鈣離子和鎂離子，原因在于鈣離子、鎂離子會(huì )抑制胰蛋白酶活性，因此不含鈣離子、鎂離子的Hank's平衡鹽溶液（D-Hank's）還可用于細胞解離前清洗以及配制胰蛋白酶消化液。與PBS和DPBS相比，Hank's緩沖液更復雜，Hank's溶液中磷酸鹽含量要低一些，因為該溶液添加的碳酸氫鈉可以起到pH調節的作用，此外，該緩沖液還添加了葡萄糖，可為細胞提供簡(jiǎn)單的營(yíng)養。

  Earle's平衡鹽溶液，是細胞分離或培養中常用的磷酸鹽緩沖液之一。EBSS專(zhuān)為CO₂環(huán)境中的細胞短期維持而設計，主要成分為葡萄糖，NaHCO₃，NaCl，KCl和Na₂HPO₄，具有維持滲透壓、保持pH穩定、提供簡(jiǎn)單營(yíng)養等作用，可用于體外實(shí)驗中組織塊、器官或細胞的漂洗、細胞或組織的運輸、細胞培養用試劑的配制以及作為細胞計數的稀釋液，也可用于誘導細胞自噬等領(lǐng)域。HBSS和EBSS兩者都是多數培養基的基礎溶液，主要區別是緩沖能力不同。HBSS的NaHCO₃含量較低（0.35克/升），其緩沖能力較弱，一般用空氣平衡，即利用空氣中的CO₂使溶液pH值平衡。EBSS含有高濃度的NaHCO₃（2.2克/升），其緩沖能力較強，溶液pH值需在5％的CO₂培養箱中才能達到平衡。如果希望在CO₂培養箱中保存組織，需要用EBSS。如果僅僅是清洗將要在細胞培養基中儲存的組織，選擇HBSS液即可。

  此外，EBSS和HBSS都可以選擇含或不含鈣鎂離子及酚紅的溶液，使用時(shí)應根據實(shí)驗的需要進(jìn)行選擇。酚紅的添加主要是指示溶液的酸堿度變化，但由于酚紅會(huì )干擾流式細胞檢測，一般在做流式細胞檢測時(shí)，使用無(wú)酚紅產(chǎn)品。鈣鎂離子會(huì )抑制胰蛋白酶的活性，故含有鈣鎂離子的緩沖液通常用作運送介質(zhì)、試劑的制備；不含鈣鎂離子的緩沖液，通常用于細胞清洗。值得注意的是含有葡萄糖和碳酸氫鈉（NaHCO₃）的溶液不能進(jìn)行高壓滅菌，如果是自行配制，應選擇過(guò)濾除菌，如果是直接訂購產(chǎn)品，要注意進(jìn)行無(wú)菌分裝。

二、產(chǎn)品展示

  青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的PBS和DPBS緩沖液產(chǎn)品，均采用過(guò)濾除菌工藝，在百級潔凈室中進(jìn)行無(wú)菌灌裝，每批產(chǎn)品均已通過(guò)無(wú)菌測試，并且經(jīng)過(guò)嚴格的質(zhì)量控制測試，確保產(chǎn)品性能和批次間一致性，亦進(jìn)行了pH、滲透壓、內毒素等測試，非常適合在細胞培養中使用。

  我公司生產(chǎn)的的PBS和DPBS緩沖液產(chǎn)品如圖1，內毒素含量不超過(guò)0.01EU/mL，檢測結果如圖2，詳情請參考：PBS和DPBS緩沖液產(chǎn)品。

圖1 商品化的PBS和DPBS緩沖液

圖2 內毒素檢測結果

1~5：濃度分別為0EU/mL、0.01EU/mL、0.025EU/mL、0.05EU/mL和0.1EU/mL的內毒素標準液檢測結果；6：我公司生產(chǎn)的PBS產(chǎn)品內毒素檢測結果。

相關(guān)產(chǎn)品：

磷酸鹽緩沖液PBS（pH7.2）（細胞緩沖液）-點(diǎn)擊查看產(chǎn)品詳情

Dulbecco's磷酸鹽緩沖液（DPBS）（不含氯化鈣和氯化鎂）-點(diǎn)擊查看產(chǎn)品詳情

注：本文屬海博生物原創(chuàng )。未經(jīng)允許不得轉載。

上一篇：常見(jiàn)問(wèn)題答疑（培養結果與觀(guān)察1）

下一篇：正交試驗法在植物組培技術(shù)中的應用