關(guān)于藥典中TSB培養基使用常見(jiàn)問(wèn)題

  在現行的國內外藥典中，胰酪大豆胨液體培養基主要用于藥品的無(wú)菌檢查，也可用于微生物限度檢驗（MPN法）、藥品的模擬灌裝試驗、菌種活化等。此培養基營(yíng)養豐富，同樣也可做為基礎培養基，加入特定成分進(jìn)行改進(jìn)，適用于多種微生物的培養（例如加入血液或血清可用于營(yíng)養苛求型微生物的培養，加入特定的抗生素可用于某些特定菌群的選擇性增菌培養基等，也可加入瓊脂制成固體培養基使用）。

一、TSB的名稱(chēng)問(wèn)題

  由于不同標準命名和翻譯的問(wèn)題，導致TSB培養基存在多個(gè)名稱(chēng)，例如胰酪大豆胨液體培養基(Trypticase Soy Broth，TSB)、胰蛋白胨大豆肉湯、胰酪胨大豆肉湯、大豆酪蛋白消化物培養基（Soybean Casein Digest Medium，SCDM）、大豆-干酪素消化物培養基等，事實(shí)上這些培養基都是相同的配方：胰酪胨17.0g/L（用胰酶消化酪蛋白制成，也可以叫胰蛋白胨、酪蛋白胨，酪蛋白主要存在于奶或哺乳動(dòng)物的肌肉組織中，因此習慣于將牛奶用胰酶消化制成的蛋白胨叫酪蛋白胨，由動(dòng)物組織經(jīng)胰酶消化制成的蛋白胨叫胰蛋白胨，這兩種都可以叫胰酪胨），大豆蛋白胨3.0g/L（用木瓜蛋白酶水解大豆制成，因此也叫大豆木瓜蛋白酶水解物、大豆胨），氯化鈉5.0g/L，磷酸氫二鉀2.5g/L，一水合葡萄糖2.5g/L，也就是EP標準、USP標準、CP標準、GB標準等使用的TSB其實(shí)是同一個(gè)培養基。就連化妝品標準使用的SCDLP培養基，其實(shí)也是以TSB為基礎，加入卵磷脂和吐溫80制成的。

二、TSB的微生物質(zhì)控

  TSB靈敏度和適用性檢查：在無(wú)菌檢查法部分，質(zhì)控菌株為枯草芽孢桿菌、白色念珠菌和黑曲霉，培養溫度為20-25℃，接種量不大于100CFU，每株菌接種2個(gè)平行管，細菌的培養時(shí)間不超過(guò)3天，真菌的培養時(shí)間不超過(guò)5天。而在非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數部分，當使用MPN法進(jìn)行計數時(shí)，也用到了TSB，在這一部分也要求對TSB進(jìn)行檢查，質(zhì)控菌株為金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌，接種量不大于100CFU，培養溫度為30-35℃，接種2個(gè)平行管，同時(shí)要求接種對照培養基（無(wú)菌檢查法部分沒(méi)有要求接種對照培養基），培養時(shí)間不超過(guò)3天。多數人使用TSB都是用于無(wú)菌檢查，因此培養基的質(zhì)量控制規程基本上是按照無(wú)菌檢查法部分執行的，并沒(méi)有注意到微生物限度檢查部分的質(zhì)量控制方法。

三、TSB的滅菌

  TSB的滅菌方式：可以采用過(guò)濾除菌、高壓蒸汽滅菌、輻照滅菌等多種方式均可，但要注意，TSB中含有少量的葡萄糖，特別是高壓蒸汽滅菌時(shí)，過(guò)度的滅菌條件會(huì )導致葡萄糖出現不同程度的焦化，因此再進(jìn)行滅菌時(shí)應提前對滅菌程序進(jìn)行測試，確保執行的滅菌條件對培養基的質(zhì)量不會(huì )造成不良影響。常見(jiàn)的TSB滅菌后出現顏色變深、變黑、pH下降等現象時(shí)，一般都是培養基受熱過(guò)度導致，培養基滅菌結束后應及時(shí)取出降溫，避免長(cháng)時(shí)間的保溫。

四、TSB的保存

  在2015版中國藥典中，制備好的培養基在2-25℃避光條件下，非密閉容器一般在3周內使用，保存在密閉容器中一般在一年內使用。而在2020版藥典中，改為了在2-25℃避光條件下，在驗證的效期內使用。TSB相對比較穩定，因含有少量葡萄糖，長(cháng)期保存過(guò)程中pH會(huì )有下降，因此為了延長(cháng)滅菌后的保存期限，應注意防止滅菌過(guò)度，pH可適當上調至7.4-7.5，確保培養基在保存期內的pH不會(huì )超出范圍。TSB的靈敏度和適用性通常在一年保存期內不會(huì )有明顯的變化。

五、TSB培養基靈敏度和適用性檢查常見(jiàn)問(wèn)題

  在進(jìn)行TSB的陽(yáng)性菌接種測試時(shí)，經(jīng)常遇到枯草芽孢桿菌不生長(cháng)、白色念珠菌不生長(cháng)，或者黑曲霉不生長(cháng)的情況�；蛘咦龇椒�驗證時(shí)使用洋蔥伯克霍爾德氏菌、銅綠假單胞菌等進(jìn)行接種測試，也可能遇到不生長(cháng)的情況。這些情況并不一定是培養基質(zhì)量的問(wèn)題，大概率可能是缺氧導致�？莶菅挎邨U菌是需氧菌，而白色念珠菌和黑曲霉是真核生物進(jìn)行有氧呼吸，它們都需要充足的氧氣才能較好的生長(cháng)，一旦氧氣不足，就可能導致生長(cháng)緩慢或者不生長(cháng)的現象出現。

  （1）容器：裝TSB的容器，應確保有足夠的空氣。若使用試管裝TSB，最好使用粗一些的試管，裝量通常在1/3左右，一般不超過(guò)1/2，使用透氣的硅膠塞。若使用瓶裝，上方應留有一定量的空氣，錐形瓶可以使用透氣塞，輸液瓶培養時(shí)也可以在膠塞上插針頭過(guò)濾器（一方面可以有充足的氧氣，另一方面可能遇到微生物產(chǎn)氣的現象，及時(shí)排出氣體防止崩塞）。

  （2）振蕩：培養基長(cháng)時(shí)間靜置培養，可能逐漸導致底層氧氣不足，微生物生長(cháng)緩慢，因此在逐日觀(guān)察結果期間，可將TSB輕輕振蕩后再觀(guān)察，一方面可以將沉底的菌體搖起來(lái)分散開(kāi)方便觀(guān)察，另一方面可以使氧氣進(jìn)入培養基中，有利于微生物的快速生長(cháng)。

注：本文屬海博生物原創(chuàng )，未經(jīng)允許不得轉載。

上一篇：嗜冷菌、需氧芽孢數的檢驗-MPC瓊脂

下一篇：亞硫酸鹽瓊脂培養基試管制備方法—鐵粉沾到試管壁上了怎么辦？