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一、生物滅菌指示劑
生物滅菌指示劑是常用來(lái)檢測滅菌效果的方法之一，對于濕熱滅菌法，一般常用嗜熱脂肪地芽孢桿菌（也可使用其他等效耐熱的菌株）的芽孢進(jìn)行測試。目前市場(chǎng)上已有多種品牌和形式的滅菌指示劑，常見(jiàn)的一般有紙片形式的和安瓿瓶（或其他玻璃管形狀）的產(chǎn)品。
嗜熱脂肪地芽孢桿菌（原名嗜熱脂肪芽孢桿菌，后重新劃分歸屬于地芽孢桿菌屬，因此改名為嗜熱脂肪地芽孢桿菌）對熱有很強的耐受性，芽孢體耐熱性更強，因此常用其芽孢制作生物指示劑。嗜熱脂肪地芽孢桿菌最適生長(cháng)溫度在55℃左右，大多數菌株生長(cháng)溫度范圍在40℃-65℃，能發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，因此常用溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水（BCP）檢測其芽孢體是否存活。
二、生物指示劑的組成和制作
若實(shí)驗室中有嗜熱脂肪地芽孢桿菌菌株，也可自行制作生物指示劑進(jìn)行測試。首先將嗜熱脂肪地芽孢桿菌接種至錳鹽營(yíng)養瓊脂平板（因培養溫度較高，培養時(shí)間較長(cháng)，平板需厚一些，也可使用錐形瓶做大斜面），55℃培養5-7天左右，可形成比較豐富的芽孢，將菌苔從平板上用生理鹽水或磷酸鹽緩沖液洗下，100℃加熱30min可殺死繁殖體留下芽孢，稀釋后可采用涂布或傾注法計數（通常使用DTA瓊脂，若沒(méi)有使用TSA也可以，置55℃培養24-48h），測定芽孢懸液濃度。
將定量體積的芽孢懸液加入至紙片上干燥處理，使紙片中含有的芽孢數大約在1-5×106CFU即可，搭配溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水管即可進(jìn)行滅菌效果測定了。也可以將芽孢懸液加入至定量體積的溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水中（通�？梢杂�0.5-2mL，含芽孢量106CFU）使用。制備好的指示劑可在2-8℃冰箱內冷藏。
三、滅菌生物指示劑的使用
對于紙片的生物指示劑，放入滅菌鍋中按照固定程序滅菌后，將紙片放置于5mL的溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水管（通常商品化培養基已配備）中55℃培養不少于7天，若出現變黃反應，說(shuō)明芽孢未被殺死，滅菌效果不達標。
對于較大體積培養基的滅菌效果測試，則應考慮使用密封的玻璃管裝的滅菌指示劑放入培養基的內部進(jìn)行監測，確認培養基的內部是否達到了相應的滅菌效果（特別是滅菌體積較大、容器密閉的情況下，更需要注意檢測容器內部是否達到了相應的滅菌效果）。密封的玻璃管裝滅菌指示劑使用后直接置于55℃培養不超過(guò)7天即可，觀(guān)察是否有變黃現象出現。未使用的保存管應置于冷藏保存（若儲存環(huán)境溫度過(guò)高會(huì )導致芽孢萌發(fā)，培養基變黃）。
注：本文屬海博生物原創(chuàng )，未經(jīng)允許不得轉載。
