一、試驗介紹

  氨基酸脫羧酶是細菌為了更好的適應環(huán)境的生長(cháng)和存活而進(jìn)化的一種機制，當細菌生長(cháng)的環(huán)境由于發(fā)酵各種碳水化合物產(chǎn)酸過(guò)多而不利于生長(cháng)時(shí)，就會(huì )誘導細菌產(chǎn)生氨基酸脫羧酶，將氨基酸的羧基脫去形成堿性的胺類(lèi)化合物，中和偏酸的環(huán)境。

  不同的細菌具有的氨基酸脫羧酶不同，一般常見(jiàn)的有賴(lài)氨酸脫羧酶、鳥(niǎo)氨酸脫羧酶和精氨酸雙水解酶，通過(guò)對這些酶的測定，可以做為細菌生化特性鑒定的手段之一。

二、培養基配方

  注：氨基酸要使用L型的，如果是DL混合型的氨基酸，用量要加倍。

三、試驗方法和原理

  將待測菌株制成約10⁹CFU/mL的菌懸液，吸取50-100μL接種至氨基酸脫羧酶試驗管（賴(lài)氨酸脫羧酶肉湯、鳥(niǎo)氨酸脫羧酶肉湯或精氨酸雙水解酶肉湯）和氨基酸脫羧酶對照管，并覆蓋無(wú)菌液體石蠟隔絕空氣，置36±1℃或適宜的條件下培養。

  原理：細菌在氨基酸脫羧酶對照管中生長(cháng)后，分解培養基中的葡萄糖產(chǎn)酸，導致培養基pH下降，因此對照管會(huì )由原來(lái)的紫色變?yōu)辄S色；在氨基酸脫羧酶試驗管中生長(cháng)先分解葡萄糖產(chǎn)酸，顏色由紫變黃，酸性條件下誘導細菌產(chǎn)生氨基酸脫羧酶，分解試驗管中的氨基酸產(chǎn)堿，中和之間的酸性環(huán)境，培養基的pH上升，顏色由黃色由變?yōu)榱俗仙�，若細菌沒(méi)有氨基酸脫羧酶，則相應的試驗管仍然會(huì )是黃色，不會(huì )是紫色。所以最終觀(guān)察結果時(shí)，若對照管與試驗管同為黃色，即為相應的氨基酸脫羧酶陰性；若對照管為黃色而試驗管為紫色，說(shuō)明細菌的氨基酸脫羧酶是陽(yáng)性的。

  圖1：左側分別為賴(lài)氨酸脫羧酶試驗管紫色和氨基酸脫羧酶對照管黃色（賴(lài)氨酸脫羧酶反應可判為陽(yáng)性）右側分別為賴(lài)氨酸脫羧酶試驗管和氨基酸脫羧酶對照管均呈黃色（賴(lài)氨酸脫羧酶反應可判為陰性）。

覆蓋石蠟的目的一方面是阻止氧氣將細菌產(chǎn)生的酸氧化成堿性物質(zhì)，另一方面是厭氧環(huán)境有利于脫羧酶的產(chǎn)生。

  注：有些細菌的氨基酸脫羧酶產(chǎn)生較慢，若觀(guān)察不到陽(yáng)性結果，可延長(cháng)培養2-4天再觀(guān)察。

四、對照管的意義

  對照管變黃的原因，是細菌在厭氧條件下分解葡萄糖產(chǎn)酸導致培養基pH下降，溴甲酚紫由紫色變?yōu)榱它S色。但根據細菌對葡萄糖利用的方式，可將細菌分為3種類(lèi)型，第一類(lèi)是發(fā)酵型細菌（常見(jiàn)的大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、志賀氏菌等腸桿菌科均屬此類(lèi)），在有氧或無(wú)氧條件下均可以分解葡萄糖產(chǎn)酸；第二類(lèi)是氧化型細菌（如銅綠假單胞菌），只能在有氧的條件下分解葡萄糖產(chǎn)酸，在無(wú)氧條件下不能生長(cháng)或不能分解葡萄糖產(chǎn)酸；第三類(lèi)是產(chǎn)堿型細菌（如糞產(chǎn)堿桿菌），不管有氧無(wú)氧條件下，均不能分解葡萄糖產(chǎn)酸。細菌的類(lèi)型可以通過(guò)O/F發(fā)酵試驗鑒定。通過(guò)以上三種類(lèi)型的細菌可以發(fā)現，只有當細菌是發(fā)酵型的，氨基酸對照管才會(huì )變成黃色，若細菌為氧化型或產(chǎn)堿型，氨基酸對照管是不會(huì )變黃的（因為不能在厭氧條件下分解葡萄糖產(chǎn)酸）。

  而氨基酸脫羧酶試驗管的顏色如果是紫色，那么就有兩種可能：1是細菌根本沒(méi)有利用里面的糖和氨基酸，或者只利用了氨基酸，所以培養基pH沒(méi)有發(fā)生過(guò)變化，還是一開(kāi)始的紫色；2是細菌先分解葡萄糖產(chǎn)酸再將氨基酸脫羧產(chǎn)堿，所以培養基最終也是紫色。問(wèn)題在于我們最終只看到了紫色，無(wú)從知曉究竟細菌是1還是2，所以就需要對照管來(lái)幫助判斷。如果對照管呈現黃色，試驗管呈現紫色，那么我們就可以確定細菌是通過(guò)2反應的，可以確認相應的氨基酸脫羧酶反應為陽(yáng)性。

五、如果在實(shí)際菌株鑒定時(shí)，遇到了對照管是紫色的情況，又該如何判定呢？

  第一種情況：就是遇到了氧化型或產(chǎn)堿型的細菌，培養后的對照管顏色與初始的紫色基本沒(méi)有明顯變化，這種情況下無(wú)法判斷細菌的氨基酸脫羧酶的陰陽(yáng)性。此氨基酸脫羧酶方法僅能檢測發(fā)酵型細菌的反應。

  圖2：從左至右分別為賴(lài)氨酸脫羧酶試驗管和氨基酸脫羧酶對照管，均為紫色，且生長(cháng)不明顯，表明細菌很可能為需氧型細菌，此現象不能進(jìn)行陰陽(yáng)性判斷

  第二種情況：即使是發(fā)酵型細菌，分解葡萄糖產(chǎn)酸的能力也是有區別的，有些細菌分解葡萄糖產(chǎn)酸能力很強（如大腸桿菌），對照管就會(huì )變成很明顯的黃色，而有些細菌雖然能分解葡萄糖，但產(chǎn)酸的能力相對弱一些（如奇異變形桿菌），或者能分解培養基中少量的蛋白胨產(chǎn)生少量的堿，導致培養基的pH下降幅度沒(méi)有那么大，對照管的顏色變化沒(méi)有那么明顯，就可能遇到灰色、淺灰紫色，淺黃綠色等不同的顏色。在這種情況下，如果細菌具有氨基酸脫羧酶，就會(huì )在試驗管產(chǎn)生更多的堿，試驗管的紫色就會(huì )明顯比對照管深許多，有明顯的色差，這種情況下也是可以判定為相應的氨基酸脫羧酶陽(yáng)性反應。若細菌不具有氨基酸脫羧酶，則試驗管的顏色變化會(huì )與對照管同步，外觀(guān)上表現為沒(méi)有色差，僅比初始的紫色變淺了一些，這種情況下也是可以判定為陰性反應。

  圖3：左側分別為賴(lài)氨酸脫羧酶試驗管和氨基酸脫羧酶對照管，均呈現淺灰色，無(wú)明顯色差，也可判為賴(lài)氨酸脫羧酶陰性；右側分別為精氨酸雙水解酶試驗管、賴(lài)氨酸脫羧酶試驗管、氨基酸脫羧酶試驗管，精氨酸脫羧酶試驗管明顯呈現比對照管更深的紫色，而賴(lài)氨酸脫羧酶試驗管則與對照管呈現顏色接近的淺紫色，可判為精氨酸雙水解酶陽(yáng)性，賴(lài)氨酸脫羧酶陰性。

相關(guān)產(chǎn)品：

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