基因工程中的工具酶

工具酶從20世紀40年代至60年代，從理論上已經(jīng)指出了基因體外重組的可能性，但科學(xué)家們面對龐大的雙鏈DNA分子束手無(wú)策，無(wú)法根據需要將DNA分子切割成單個(gè)的基因片段，也無(wú)法將兩個(gè)DNA片段正確地連接起來(lái)。限制性核酸內切酶的發(fā)現解決了DNA分子的切割問(wèn)題，1970年，Smith和Wilcox從流感嗜血桿菌（Haemophilus influenzae）中分離并純化了限制性核酸內切酶Hind Ⅱ；1972年，Boyer實(shí)驗室發(fā)現了Eco R I核酸內切酶，能夠識別核苷酸鏈上的GAATTC序列；從此以后，相繼發(fā)現了各種類(lèi)似于Eco R I的限制性核酸內切酶，它們可以在特殊的位點(diǎn)切割DNA分子，因此，有人將限制性核酸內切酶形象地稱(chēng)為“長(cháng)眼睛的剪刀”。

幾乎與此同時(shí)的另一項重要發(fā)現是DNA連接酶。1967年，世界上有5個(gè)實(shí)驗室幾乎同時(shí)發(fā)現了DNA連接酶。這種酶能夠將DNA的裂口修復，將兩條DNA片段按預定的方向重新連接在一起。1970年，美國Khorana實(shí)驗室發(fā)現了具有更高連接活性的T₄ DNA連接酶�？梢院敛豢鋸埖卣f(shuō)DNA連接酶就是重組DNA的“縫紉針和線(xiàn)”。

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