噬菌體載體

質(zhì)粒載體可以克隆的DNA最大片段一般在10kb左右，但在構建一個(gè)基因文庫時(shí)往往需要克隆更大的DNA片段以減少克隆的數量。為此，人們將噬菌體發(fā)展成為一種克隆載體。

λ噬菌體屬于雙鏈線(xiàn)性DNA分子。野生型λ噬菌體內含有太多的限制性酶切位點(diǎn)，需要經(jīng)過(guò)改造后才能成為可應用的載體。Charon系列λ噬菌體有插入型和替換型兩種，帶有來(lái)自大腸桿菌的β半乳糖苷酶基因lacZ。M13噬菌體是單鏈環(huán)狀DNA，改造后的M13mp8，加入了大腸桿菌的lac操縱子，常用于核酸測序。

λ噬菌體是線(xiàn)性雙鏈DNA分子，其長(cháng)度為48502bp，兩端各有由12個(gè)堿基組成的5’端凸出的互補黏性末端，當λDNA進(jìn)入宿主細胞后，互補黏性末端連接成為環(huán)狀DNA分子，這種由黏性末端結合形成的序列，稱(chēng)為cos位點(diǎn)；λ噬菌體為溫和噬菌體，可以整合到宿主細胞染色體DNA上，以溶原狀態(tài)存在，隨染色體的復制而復制；λ噬菌體能包裝本身長(cháng)度的 75%～105%，約38～54kb的DNA片段。

構建λ噬菌體載體時(shí)，需要抹去某種限制性?xún)惹忻冈谌隓NA分子上的一些識別序列，只在非必需區保留1～2個(gè)識別序列。若只保留1個(gè)識別序列，則可供外源DNA插入；若保留2個(gè)識別序列，則2個(gè)識別序列之間的區域可被外源DNA片段置換也可以用合適的限制性?xún)惹忻盖腥ゲ糠址潜匦鑵^，但是所構建的入DNA載體應不小于38kb；同時(shí)在λ噬菌體分子合適區域應插入可供篩選的標記基因。

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