革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌的判斷方法

一、革蘭氏染色法

  做為最經(jīng)典的方法，革蘭氏染色法是實(shí)驗室最常用分辨和觀(guān)察細菌種類(lèi)的方法。根據細菌的細胞壁構成不同，將細菌分為了革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌。革蘭氏陽(yáng)性菌的細胞壁較厚（約20-80nm），主要由90%的肽聚糖和10%的磷壁酸構成，而革蘭氏陰性菌的細胞壁較�。�約10-15nm），主要由肽聚糖、脂多糖層構成。進(jìn)行革蘭氏染色時(shí)，由于革蘭氏陽(yáng)性菌的細胞壁較厚且為網(wǎng)狀結構，結晶紫與碘液形成的復合物會(huì )留在菌體內不易被乙醇脫色，而革蘭氏陰性菌則很容易被乙醇脫色，因此再用另一種染料復染，就可以得到復染的顏色。

  注意事項：通常要用新鮮的培養物進(jìn)行操作，細菌老化可能會(huì )導致細胞壁結構改變，染色結果不準確。

二、拉絲試驗

  常用于革蘭氏染色結果不明確的細菌的測試，有些細菌細胞壁結構比較特殊，革蘭氏染色結果不準確，經(jīng)常會(huì )用到拉絲試驗進(jìn)行確證。革蘭氏陰性菌細胞壁薄且含有脂類(lèi)蛋白質(zhì)等成分，在4%氫氧化鉀溶液中非常容易裂解，釋放出菌體內的DNA，使溶液變粘稠，出現拉絲的現象，而革蘭氏陽(yáng)性菌沒(méi)有此現象（也有人認為拉絲現象是由于革蘭氏陰性菌的細胞壁中的脂多糖、脂蛋白和脂質(zhì)在氫氧化鉀的作用下發(fā)生皂化反應形成粘稠物，所以拉絲試驗陽(yáng)性，而陽(yáng)性菌細胞壁沒(méi)有這些成分，拉絲試驗為陰性）。

  注意事項：細菌存放時(shí)間過(guò)長(cháng)會(huì )有老化裂解現象，因此此試驗同樣要求使用新鮮培養物進(jìn)行操作。配制的氫氧化鉀濃度通常用4%，濃度過(guò)低會(huì )導致假陰性結果，挑取菌量也要足夠，否則也會(huì )出現假陰性或遲緩反應。

三、藥敏試驗

  不同的抗生素作用機理不同，例如萬(wàn)古霉素和青霉素都是主要通過(guò)干擾細胞壁中肽聚糖來(lái)干擾細胞壁的合成，而革蘭氏陽(yáng)性菌的細胞壁中肽聚糖占了90%，因此許多革蘭氏陽(yáng)性菌都對萬(wàn)古霉素和青霉素敏感，而革蘭氏陰性菌通常表現為耐藥。又如腸道菌長(cháng)期與膽汁接觸，對膽鹽具有較強的耐受性，而多數的革蘭氏陽(yáng)性菌受到膽鹽影響細胞膜會(huì )被破壞自溶，在含膽鹽的培養基中不能生長(cháng)或生長(cháng)很差。根據細菌對不同藥物的敏感性測試，也可幫助分辨為革蘭氏陽(yáng)性菌或陰性菌。

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