一、稀釋液的原理及成分
稀釋液主要用于樣品的制備,使樣品均勻分散開(kāi),樣品中的菌落能夠均勻懸浮于稀釋液中,并維持菌落數在短時(shí)間內相對穩定,以便于后續的監測。對于含有抑菌成分的樣品,可在稀釋液中加入對應的中和劑成分,消除抑菌成分的影響。對于厭氧菌的稀釋時(shí),可在稀釋液中加入少量的還原性成分(如半胱氨酸),減少氧氣的毒害作用。對于油性的樣品,可在稀釋液中加入表面活性劑(如吐溫80)幫助溶解分散均勻。
稀釋液通常由氯化鈉、磷酸鹽、蛋白胨、還原劑、中和劑等成分中的一種或幾種組成,氯化鈉主要維持滲透壓,磷酸鹽維持pH的相對穩定,少量的蛋白胨有助于維持細菌的活力,還原劑可幫助形成厭氧化解,中和劑可消除抑菌成分的抑菌效果。
二、常用的稀釋液選擇
1.0.85%-0.9%氯化鈉溶液(生理鹽水)
配制簡(jiǎn)單,實(shí)驗室最常用,對于一般細菌或真菌菌懸液的制備、偏中性樣品液的制備,均可使用,不具有增殖效果,制備好的菌懸液可在驗證的效期內使用。
2.磷酸鹽緩沖液
效果與生理鹽水相似,具有一定的緩沖效果,通常使用pH7.2的磷酸鹽緩沖液,對于pH偏酸或偏堿的樣品,也可選用其他pH的磷酸鹽緩沖液制備,不具有增殖效果,制備好的菌懸液可在驗證的效期內使用。
3.0.1%蛋白胨水
成分為1g/L蛋白胨,相比較于生理鹽水,0.1%蛋白胨水更有利于一些脆弱細菌的存活(如厭氧菌等),稀釋產(chǎn)氣莢膜梭菌、雙歧桿菌等細菌時(shí),效果要優(yōu)于生理鹽水。因蛋白胨有增殖效果(時(shí)間久了細菌會(huì )繁殖變多),因此用0.1%蛋白胨水制備的菌懸液需及時(shí)使用,一般細菌建議在45min內使用,厭氧菌應在15min內使用。
4.pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液
相比較于0.1%蛋白胨水,增加了少量的磷酸鹽起到緩沖作用,效果與0.1%蛋白胨水相似,更多用于藥品懸液制備,也可制作細菌懸液,具有增殖效果,制備的菌懸液建議在45min內使用(厭氧菌應在15min內使用)。
5.半胱氨酸稀釋液
主要成分有氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、碳酸鈉、半胱氨酸組成,無(wú)增殖效果,通常用于厭氧菌的稀釋和樣品制備。
6.蛋白胨-鹽溶液
由氯化鈉和少量蛋白胨組成,具有增殖效果,與0.1%蛋白胨水效果相似,一般用于芽孢數測定樣品制備,也可用于一般樣品或菌懸液的制備。
7.明膠磷酸鹽緩沖液
由明膠和磷酸鹽組成,一般用于肉毒梭菌檢驗樣品的制備。
8.卵磷脂吐溫稀釋液
由少量蛋白胨、卵磷脂和吐溫80組成,卵磷脂和吐溫80具有中和防腐劑的作用,通常用于含防腐劑樣品懸液的制備。
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