常見(jiàn)微生物培養基原材料的介紹--瓊脂
錄入時(shí)間:2024-1-10 14:51:50
來(lái)源：食品微生物實(shí)驗室質(zhì)量管理手冊（第二版）
一、瓊脂的研發(fā)歷史及特點(diǎn)
瓊脂,英文名為Agar,又名洋菜、凍粉、瓊膠或寒天,是以石花菜、紫菜、江蘺及其他紅藻類(lèi)為原料,經(jīng)浸出并脫水干燥制成的黏液質(zhì)。線(xiàn)形瓊脂呈細長(cháng)條狀,類(lèi)白色至淡黃色;半透明,表面皺縮,微有光澤,質(zhì)輕軟而韌,不易折斷;完全干燥后,則脆而易碎;無(wú)臭,味淡。粉狀瓊脂為細顆�；蝼[片狀粉末,無(wú)色至淡黃色;用冷水裝片,在顯微鏡下觀(guān)察.為無(wú)色的不規則多角形黏液質(zhì)碎片;無(wú)臭,味淡。本品在沸水中溶解,在冷水中不溶,但能膨脹成膠塊狀水溶液顯中性反應。
瓊脂由瓊脂糖(Agarose)和瓊脂果膠(Agaropectin)兩部分組成﹐瓊脂糖是不含硫酸酯(鹽)的非離子型多糖,是形成凝膠的組分,其大分子鏈連接著(zhù)1,3苷鍵交替相連的β-D-半乳糖殘基和3,6-內醚-L-半乳糖殘基。瓊脂果膠是非凝膠部分,帶有硫酸酯(鹽)、葡萄糖醛酸和丙酮酸醛的復雜多糖。
1881年,德國醫生赫斯和細菌學(xué)創(chuàng )始人科赫首先將瓊脂應用于細菌培養基,認為瓊脂是唯一理想的固體培養基凝固劑。到了19世紀末,瓊脂成為代替明膠的首選凝膠劑，廣泛用于培養基。
二、質(zhì)控方法
瓊脂的質(zhì)控指標包括色澤,氣味和形態(tài)等感官要求,水分、灰分、淀粉試驗、水不溶物、重金屬、凝固溫度、融化溫度、凝膠強度和澄清度等理化指標,以及生物學(xué)指標。本節重點(diǎn)介紹凝膠強度、水分﹑澄清度和生物學(xué)指標。
(一）凝膠強度
GB 1975-2010《食品安全國家標準 食品添加劑 瓊脂(瓊膠)》中A.5凝膠強度的測定法可以精確測定凝膠強度。因國家標準方法比較復雜,通常采用凝膠強度儀或質(zhì)構儀進(jìn)行測定。
配制1.5%瓊脂水溶液,加熱煮沸至完全溶解,121℃高壓滅菌30min,冷卻至50℃左右，搖勻,倒入50mL燒杯中,每杯加25ml,凝固后﹐將燒杯倒置過(guò)夜,提前取出置25℃左右放置30min,用凝膠強度儀進(jìn)行測定﹐至瓊脂表面壓破為止,顯示的數值為凝膠強度,單位是g/cm2,每個(gè)樣品測定3個(gè)平行,取平均值。質(zhì)構儀按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。GB 1975-2010規定瓊脂的凝膠強度(1.5%溶液,20℃)可分為低強度150g/cm2～400g/cm2 、中強度401g/cm2～800g/cm2.高強度801g/cm2～1200g/cm2和超高強度>1200g/cm2。
(二)水分測定
瓊脂水分的測定方法一般采用直接干燥法、減壓干燥法和紅外干燥法,其中直接干燥法和減壓干燥法詳見(jiàn)GB 5009.3-2010《食品安全國家標準 食品中水分的測定》中第一法和第二法。因紅外干燥法操作簡(jiǎn)單,本書(shū)重點(diǎn)介紹該方法。
稱(chēng)取瓊脂2g～3g,均勻分布于托盤(pán)上,置水分測定儀上進(jìn)行測定,設置烘烤溫度為105℃,通過(guò)紅外線(xiàn)烘烤至恒重,根據樣品重量的變化,自動(dòng)顯示水分的數值。平行測定兩次,取其平均值。GB 5009.3-2010規定水分≤22%,2015版藥典規定水分≤20%
(三)澄明度
配制1.5%瓊脂水溶液，加熱煮沸至完全溶解,121℃高壓滅菌30min,冷卻至50℃左右,搖勻后倒入10mm×10mm比色杯,待凝固后倒置,放4h后用可見(jiàn)光分光計測定。也可以搖勻后倒入酶標板,待凝固后倒置,放30min后用酶標儀測定。分別測定在430nm、525nm和655nm波長(cháng)時(shí)的透光率。430nm在0.5～0.75,525nm在0.3～0.49和655nm在0.2～0.3。
(四)生物學(xué)檢驗
1.營(yíng)養瓊脂的配制
營(yíng)養瓊脂
配方成分
|
用量
|
蛋白胨
|
10.0g
|
牛肉浸粉
|
3.0g
|
氯化鈉
|
5.0g
|
瓊脂
|
15.0g
|
蒸餾水
|
1L
|
pH值(25℃)
|
7.3±0.2
|
稱(chēng)取上述成分于1L蒸餾水中,加熱煮沸至完全溶解，121℃高壓滅菌15min,冷卻至46℃左右,鋪平板備用。
2.質(zhì)控菌株
大腸埃希氏菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC6538、銅綠假單胞菌CMCC(B)10104和枯草芽孢桿菌ATCC6633。
3.質(zhì)控方法
采用GB 4789.28-2013《食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 培養基和試劑的質(zhì)量要求》中定量的方法中表D.1測定質(zhì)控菌株的回收率。
4.結果判定
判定結果參照表4-6-2。
表4-6-2 瓊脂的生物學(xué)檢驗
質(zhì)控菌株
|
質(zhì)控指標
|
方法
|
培養條件
|
質(zhì)控評定標準
|
特征反應
|
|
大腸埃希氏菌
ATCC 25922
|
生長(cháng)率和
特異性
|
定量
|
36℃±1℃
24h±2h
|
PR≥0.7
|
/
|
|
金黃色葡萄球菌
ATCC 6538
|
PR≥0.7
|
產(chǎn)生黃色色素
|
|
銅綠假單胞菌
CMCC(B)10104
|
PR≥0.7
|
產(chǎn)生綠色色素
|
|
枯草芽孢桿菌
ATCC 6633
|
PR≥0.7
|
/
|
表4-6-3 瓊脂的產(chǎn)品檢驗報告單
參數
|
檢測結果
|
外觀(guān)
|
類(lèi)白色流動(dòng)性粉末
|
水分
|
10.30%
|
凝膠強度(1.5%,121℃,20min)
|
1020g/cm2(20℃)
|
磷酸鹽沉淀
|
高壓后無(wú)沉淀
|
灰分
|
≤1.0%
|
熔化溫度(1.5%)
|
78℃
|
凝固溫度(1.5%)
|
36.3℃±0.5℃
|
pH值(高壓后)
|
6.82
|
上一篇：黃豆餅粉硫酸銨培養基
下一篇：蛋白胨硝酸銨培養基
海博微信公眾號
海博天貓旗艦店
