菌種保藏的原理和方法

1、菌種保藏原理

選用優(yōu)良的純種，最好是休眠體（分生孢子、芽孢等），創(chuàng )造一個(gè)是微生物代謝不活潑，生長(cháng)繁殖受抑制，難以突變的環(huán)境條件。其環(huán)境要素是干燥、低溫、缺氧、缺營(yíng)養以及添加保護劑等。

2、菌種保藏常用方法

（1）定期移植保藏法

將菌種接種于適宜的斜面或液體培養基，也可進(jìn)行穿刺培養，待生長(cháng)成健壯的菌體（對數期細胞、有性孢子或無(wú)性孢子）后，將菌種放置4℃冰箱保藏，每間隔一定時(shí)間需重新移植培養一次。芽孢桿菌每 3~6個(gè)月移種一次，其他細菌每月移種一次。此方法最早使用且至今仍普遍使用。

（2）液體石蠟保藏法

在生長(cháng)良好的斜面表面覆蓋一層無(wú)菌的液體石蠟，液面高出培養基1cm，將其置試管架上以直立狀態(tài)低溫保藏。此方法是定期保藏法的補充。

（3）沙管保藏法、土壤保藏法

取河沙過(guò)24目篩。用10%-20%的鹽酸沒(méi)泡除去有機質(zhì)，洗滌，烘干，分裝入安瓿管，加塞滅菌。需要保藏的菌株先用斜面培養基培養，再用無(wú)菌水制成細胞或孢子懸液，將10滴懸液注入裝有洗凈、滅菌河沙的沙管內，使細胞或孢子吸附在沙上，放到干燥器中吸干沙中的水分，將干燥后的沙管用火焰熔封管口�？梢允覝鼗虻蜏乇２�。土壤法以土壤代替河沙，不需酸洗，經(jīng)風(fēng)干、粉碎、過(guò)24目篩，分裝滅菌后，同上制備。此法適用于芽孢桿菌，梭狀芽孢桿菌、放線(xiàn)菌和一些絲真菌的保藏。

（4）麩皮保藏法

或稱(chēng)曲法保藏，將麩皮(也可用各種谷物代替）水或其他培養基成分以一定的比例拌勻，加水或培養液與麩皮的比例為1:0.8或1:1克1:1.5，原則是按照不同菌種對水分要求不同而定。將拌勻的麩皮分裝在試管或安瓿管等容器中，裝入的麩皮應保特疏松，不要緊壓。高溫滅菌后，將隨種的孢子液接入。適宜溫度下培養，直至長(cháng)出菌絲。再放在干燥器中干燥后，20℃以下溫度保藏。也可將小管用火焰熔封。常用于放線(xiàn)菌和霉菌的保藏。

（5）蒸餾水保藏法

每個(gè)試管中裝5ml滅菌的無(wú)菌水，用接種針從斜面或平板上挑取一環(huán)菌種細胞，接入蒸餾水中并使之懸浮，試管用無(wú)菌的橡皮塞塞緊，放置10℃低溫保藏。需用時(shí)，可從管內移出一環(huán)接到培養基上，而原來(lái)的管加塞后仍可繼續保藏。此法是最簡(jiǎn)單的保藏方法。

（6）冷凍干燥保藏法

將菌液在凍結狀態(tài)下升華其中水分，最后獲得干燥的菌種樣品。此方法是目前被廣泛推崇的方法。

（7）液態(tài)超低溫保藏法

將菌種懸浮封存于圓底安瓿管或塑料的液氮保存管（材料應耐受較大溫差驟然變化）內，放到-196℃~-150℃的液氮罐或液氮水箱內保藏。此方法已被公認為當前最有效的菌種長(cháng)期保存技術(shù)之一，適用范圍最廣的微生物保藏法。

（8）甘油保藏法

菌種懸浮在10%（體積分數）甘油蒸餾水，置低溫（-80~70℃）保藏。實(shí)際中，常將待保藏菌培養至對數期的培養液直接加到已滅過(guò)菌的甘油中，并使甘油的終濃度在10%~30%左右，再分裝于小離心管中，置低溫保藏�；�因工程常用此法保藏。

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