高壓電穿孔法

外源DNA分子還可以通過(guò)電穿孔法轉人受體細胞。所謂電穿孔法（electroporation），就是把宿主細胞置于一個(gè)外加電場(chǎng)中，通過(guò)電場(chǎng)脈沖在細胞壁上打孔， DNA分子就能夠穿過(guò)孔進(jìn)入細胞。通過(guò)調節電場(chǎng)強度、電脈沖頻率和用于轉化的DNA濃度，可將外源DNA分別導入細菌或真核細胞。電穿孔法的基本原理是：

在適當的外加脈沖電場(chǎng)作用下，細胞膜（其基本組成為磷脂）由于電位差太大而呈現不穩定狀態(tài)，從而產(chǎn)生孔隙使高分子（如DNA片段）和低分子物質(zhì)得以進(jìn)入細胞質(zhì)內，但還不至于使細胞受到致命傷害。切斷外加電場(chǎng)后，被擊穿的膜孔可自行復原。電壓太低時(shí)DNA不能進(jìn)入細胞膜，電壓太高時(shí)細胞將產(chǎn)生不可逆損傷，因此電壓應控制在300～600V范圍內，維持時(shí)間約為20～100ms，溫度以0℃為宜。較低的溫度使穿孔修復遲緩，有利于增加 DNA進(jìn)人細胞的機會(huì )。

用電穿孔法實(shí)現基因導人比CaCl₂轉化法方便、轉化率高，尤其適用于酵母菌和霉菌。該法需要專(zhuān)門(mén)的電穿孔儀。

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