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一、試驗原理
哥倫比亞血瓊脂基礎（HB0124）營(yíng)養非常豐富，可用于培養各種營(yíng)養要求苛刻的細菌。特殊蛋白胨為多種蛋白胨類(lèi)混合物，提供細菌生長(cháng)所需的氮源、氨基酸、維生素及生長(cháng)因子，促進(jìn)營(yíng)養要求苛刻的細菌生長(cháng)；可溶性淀粉提供碳源；氯化鈉維持平衡的滲透壓；瓊脂是凝固劑。
本培養基使用時(shí)需配套添加無(wú)菌脫纖維羊血（1001339-1）使用。脫纖維羊血中含有蛋白質(zhì)和生長(cháng)促進(jìn)因子。進(jìn)一步保障營(yíng)養要求苛刻的微生物生長(cháng)，如鏈球菌等。血液添加入含瓊脂培養基中，不僅可促進(jìn)微生物快速生長(cháng)繁殖，也可以觀(guān)察溶血現象，不同的細菌都有其特定的溶血環(huán)，可據此對細菌進(jìn)行一定程度的鑒別。
二、培養基配方（g/L）
|
特殊蛋白胨 |
23.0 |
|
可溶性淀粉 |
1.0 |
|
氯化鈉 |
5.0 |
|
瓊脂 |
10.0 |
|
pH 7.3±0.2（25℃） |
|
三、試驗方法
1、稱(chēng)取本品39.0g，加熱溶解于1000mL蒸餾水中，分裝，121℃高壓滅菌15分鐘，冷卻至50℃左右時(shí)，加入5%-10%無(wú)菌脫纖維羊血，混勻備用。
2、準備質(zhì)控菌株，接種至哥倫比亞血瓊脂上。
3、放置于36℃±1℃恒溫培養箱中，需氧培養18h-24h。
四、質(zhì)控結果
接種以下質(zhì)控菌株，按規定的適宜條件培養后，菌株培養結果見(jiàn)圖1。
|
質(zhì)控菌株 |
菌株編號 |
接種量（CFU） |
方法 |
質(zhì)控結果 |
|
蠟樣芽孢桿菌 |
CMCC(B) 63303 |
/ |
定性 |
菌落周?chē)a(chǎn)生β溶血環(huán) |
|
金黃色葡萄球菌 |
ATCC 6538 |
/ |
定性 |
菌落周?chē)a(chǎn)生β溶血環(huán) |
|
乙型溶血性鏈球菌 |
CMCC(B) 32210 |
/ |
定性 |
菌落周?chē)a(chǎn)生β溶血環(huán) |
|
肺炎鏈球菌 |
ATCC 6305 |
/ |
定性 |
菌落周?chē)a(chǎn)生α溶血環(huán) |
圖1 哥倫比亞血瓊脂基礎培養基的微生物質(zhì)控結果
五、注意事項
1、培養基中含少量淀粉，若滅菌前未加熱煮沸溶解，滅菌后冷卻可能出現少量白色沉淀。
2、無(wú)菌脫纖維羊血需置于2℃-8℃進(jìn)行保存，在試驗過(guò)程中，無(wú)菌脫纖維羊血要提前拿出使其自然恢復至室溫后再使用，以免與瓊脂溫差過(guò)大，導致羊血與液態(tài)瓊脂混合時(shí)瓊脂接觸到低溫羊血瞬間凝固產(chǎn)生瓊脂塊影響平板制備效果。
3、培養基在加入無(wú)菌脫纖維羊血時(shí)，要注意培養基溫度，避免過(guò)高或過(guò)低，以45℃-50℃為宜，可通過(guò)恒溫水浴鍋進(jìn)行溫度控制。同時(shí)要控制好錐形瓶搖動(dòng)混勻的力度，以免產(chǎn)生較多氣泡，影響所制平板的外觀(guān)質(zhì)量和使用效果�？砷喿x相關(guān)文章：《光潔平整不產(chǎn)氣泡的血平板怎么制作》進(jìn)一步了解學(xué)習。
4、因哥倫比血瓊脂營(yíng)養成分及其豐富，十分利于各種細菌微生物生長(cháng)，故在制備及使用哥倫比亞血瓊脂的過(guò)程中請務(wù)必注意無(wú)菌操作，以免造成雜菌污染，影響試驗結果。
5、無(wú)菌脫纖維羊血產(chǎn)品源自羊血液制得，故保質(zhì)期較短（1個(gè)月），建議在選購本產(chǎn)品時(shí)充分考慮試驗所需用量，避免一次性過(guò)多購入導致產(chǎn)品超保質(zhì)期失效。為保證效果穩定，盡量避免同一瓶無(wú)菌脫纖維羊血反復取用（2℃-8℃保存/恢復室溫），這可能導致血液成分加速氧化、失活，也會(huì )帶來(lái)更大的雜菌污染風(fēng)險，無(wú)菌脫纖維羊血在出現變色后應避免再次使用。
相關(guān)產(chǎn)品：
哥倫比亞血瓊脂基礎-點(diǎn)擊查看產(chǎn)品詳情
注:本文屬海博生物原創(chuàng ),未經(jīng)允許不得轉載。
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