白色念珠菌的活化、保存及確認方法

一、白色念珠菌簡(jiǎn)介

  白色念珠菌（Candida albicans）又叫白色假絲酵母，是一種雙相真菌，在培養基上生長(cháng)通常呈現酵母相，菌落呈白色圓形凸起，具有酵母的香味，顯微鏡下觀(guān)察時(shí)菌體呈卵圓形，與一般的酵母菌無(wú)異，感染人體致病時(shí)一般呈現為菌絲相，菌體有細長(cháng)菌絲芽管產(chǎn)生，可供菌體吸收營(yíng)養和附著(zhù)在人體組織表面。

二、活化方法

  培養基的選擇：白色念珠菌營(yíng)養要求不高，通常使用沙氏葡萄糖瓊脂/液體培養基或馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基進(jìn)行活化，在營(yíng)養瓊脂、TSA等細菌培養基上雖然也能生長(cháng)，但較為緩慢，一般不常用。白色念珠菌在25-37℃培養均可生長(cháng)，一般培養2-3天即可。

  操作方法：若菌種為凍干粉形式，按照說(shuō)明書(shū)溶解后，可直接涂布或劃線(xiàn)至SDA/PDA平板上，也可加入至SDB/PDB等液體培養基中；若菌種為甘油凍存管形式，從冰箱中取出速融后，涂布或劃線(xiàn)至SDA/PDA平板上，也可加入至SDB/PDB等液體培養基中；若菌種為瓷珠形式，挑取瓷珠可轉入SDA/PDA平板上，也可加入至SDB/PDB等液體培養基中，20-25℃培養2-3天。

三、實(shí)驗室常用保存方法

  1.斜面保存法

  將SDA或PDA培養基制成斜面管，接種白色念珠菌后培養至菌落生長(cháng)良好，置于2-8℃可保存1-3個(gè)月，超過(guò)3個(gè)月容易出現菌種老化、污染、變異等現象，建議及時(shí)傳代。

  2.脫脂牛奶/甘油/瓷珠冷凍保存法

  可挑取非選擇性培養基上培養好的白色念珠菌至脫脂牛奶/液體/瓷珠菌種保存管中制成約10⁸-10⁹CFU/mL的菌液（瓷珠保存法需搖勻后棄菌液保留瓷珠），置于冰箱或液氮罐中冷凍保存，在-70℃以下可保存兩年以上，在-20℃也能很容易保存一年以上，白色念珠菌生命力強，很容易保存數年或數十年。

四、菌種的確認

  1.菌落特征：白色念珠菌在平板上菌落呈現白色圓形凸起狀，具有酵母香味，在念珠菌顯色平板上呈綠色菌落。

SDA平板	念珠菌顯色平板

  3.芽管試驗：將白色念珠菌接種至吐溫80-玉米粉瓊脂上，20-25℃培養2-3天，挑取1環(huán)菌接種至兔血清，37℃培養2-3小時(shí)，鏡檢觀(guān)察，菌體可產(chǎn)生芽管。

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