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將抗生素生產(chǎn)菌經(jīng)誘變處理后篩選出失去生產(chǎn)能力的突變株，如果生產(chǎn)能力的喪失是一次突變的結果，往往意味著(zhù)抗生素生物合成途徑中的某一種酶已經(jīng)失活，這樣的突變株稱(chēng)為阻斷突變株。由于酶失活，使生物合成不能繼續，中間代謝產(chǎn)物就會(huì )積累并被分離提純。關(guān)鍵問(wèn)題是要確認它的確是抗生素合成的中間代謝產(chǎn)物，為此也必須借助于放射性標記技術(shù)。在培養阻斷突變株的培養基中加人放射性標記的前體，就可以得到有放射性標記的中間代謝產(chǎn)物，然后將它加到抗生素生產(chǎn)菌種的培養基中，如果結合到抗生素分子中的帶有放射性標記中間產(chǎn)物的比例很高，就可以證明該物質(zhì)是抗生素代謝途徑的中間產(chǎn)物。另外一種方法是在不加營(yíng)養物質(zhì)的懸浮細胞培養時(shí)，如果加人了中間產(chǎn)物后能夠提高抗生素產(chǎn)量，也可以間接證明該物質(zhì)確實(shí)是中間代謝產(chǎn)物。
那么，怎樣確定突變株只經(jīng)過(guò)一次突變呢?如果將兩個(gè)突變株放在一個(gè)搖瓶中進(jìn)行混合培養并與它們的單獨培養進(jìn)行比較，如果其中的一個(gè)突變株單獨培養時(shí)不產(chǎn)中間代謝產(chǎn)物而混合培養時(shí)能檢測到，則說(shuō)明該菌株可能經(jīng)歷了兩次突變；而一起培養的另一菌株則具有積累中間代謝產(chǎn)物的能力，從而證明它只經(jīng)歷了一次突變。如果混合培養時(shí)一個(gè)突變株產(chǎn)生的中間代謝產(chǎn)物被另一個(gè)突變株消耗，則可以通過(guò)將其中一個(gè)突變株單獨培養的培養液加到另一突變株的培養液，看該突變株是否能恢復抗生素生產(chǎn)，如果是的話(huà)，就可證實(shí)后者具有積累中間代謝產(chǎn)物的能力。
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