選擇性增菌培養基的出廠(chǎng)檢驗及驗收方法

一、選擇性增菌培養基的介紹

 在分離特定的目標菌時(shí)，若樣品中存在較多的干擾菌，直接分離會(huì )比較困難，而選擇性增菌培養基的主要作用是盡可能抑制雜菌的生長(cháng)，讓目標菌得到較多的增殖，逐漸稱(chēng)為優(yōu)勢群體，則可以很好的提高檢出率。

二、培養基的出廠(chǎng)檢驗

   待測培養基制備：按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行配制，分裝至試管，每管10mL。

1.混合菌的接種

菌懸液制備：將質(zhì)控菌株接種至非選擇性肉湯或平板中進(jìn)行活化培養，使用生理鹽水或磷酸鹽緩沖液進(jìn)行十倍系列稀釋至適宜梯度。

接種及培養：向待測試管中接種10-100CFU的目標菌，以及1000-5000CFU的非目標菌，接種總體積為1mL，同時(shí)分別使用TSA對目標菌和非目標菌進(jìn)行接種量的計數，置于標準中規定的條件下進(jìn)行培養。

例：檢驗7.5%氯化鈉肉湯，需在試管中接種10-100CFU的金黃色葡萄球菌和1000-5000CFU的大腸埃希氏菌，可將金黃色葡萄球菌制成約10-100CFU/mL的菌懸液，大腸埃希氏菌制成約10000-50000CFU/mL的菌懸液，吸取0.9mL金黃色葡萄球菌菌液及0.1mL大腸埃希氏菌菌液至7.5%氯化鈉肉湯中，金黃色葡萄球菌菌液可直接使用TSA傾注計數接種量，大腸埃希氏菌菌液需進(jìn)行百倍稀釋后，吸取1mL菌液用TSA傾注計數接種量。將接種后的培養基置36±1℃培養18-24h。

2.非目標菌的接種

菌懸液制備：將質(zhì)控菌株接種至非選擇性肉湯或平板中進(jìn)行活化培養，使用生理鹽水或磷酸鹽緩沖液進(jìn)行十倍系列稀釋至含菌量為1000-5000CFU/mL。

接種及培養：吸取1mL制備好的菌懸液加入至待測培養基試管中，接種2支平行，置于標準中規定的條件下進(jìn)行培養。

3.混合菌培養液的接種

用10μL接種環(huán)取1環(huán)經(jīng)培養后的混合菌培養液，劃線(xiàn)接種到特定的選擇性平板上，同時(shí)每管接種一個(gè)平板。按標準方法中規定的培養時(shí)間和溫度進(jìn)行培養。

例：用10μL接種環(huán)挑取1環(huán)培養后的7.5%氯化鈉肉湯混合菌測試管的培養液，劃線(xiàn)到Baird-parker瓊脂平板上，每支試管劃1個(gè)平板，36±1℃培養24-48h

4.非目標菌培養液的接種

吸取10μL經(jīng)培養后的非目標菌培養液，涂布或傾注法接種到非選擇性平板（如TSA）上。同時(shí)每管接種一個(gè)平板，并按標準規定的培養條件培養平板。

5.結果判定

混合菌接種選擇性平板上的典型特征菌落數應＞10CFU，非目標菌在非選擇性平板上菌落數應＜100CFU。

解析：選擇性增菌培養基通常有較強的抑菌性，除了對非目標菌有抑制性以外，有時(shí)對目標菌的生長(cháng)也具有一定的抑制性，因此在接種10-100CFU的目標菌培養結束后，經(jīng)常會(huì )觀(guān)察不到明顯的生長(cháng)渾濁現象，因此需要通過(guò)轉接選擇性平板觀(guān)察菌落數來(lái)確定目標菌在選擇性增菌培養基中有沒(méi)有增殖。非目標菌也是如此，通過(guò)轉接計數平板上的菌落數來(lái)判斷非目標菌在選擇性增菌培養基中有無(wú)明顯的增殖。

三、培養基的驗收方法

將質(zhì)控菌株接種至非選擇性肉湯培養基中過(guò)夜培養，稀釋至10^-3，也可采用其他方法制備含菌量10⁵-10⁷CFU/mL的菌懸液，使用1μL接種環(huán)挑取1環(huán)菌液，接種至待測培養基中，置于標準規定的條件進(jìn)行培養。

結果判定：接種目標菌的試管濁度值應達到2，接種非目標菌的試管濁度應為0或1。

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