大腸埃希氏菌的活化、保存及確認方法

一、大腸埃希氏菌簡(jiǎn)介

  大腸埃希氏菌（Staphylococcus aureus）是隸屬于埃希氏菌屬的一種常見(jiàn)的菌株，革蘭氏染色為陰性桿菌，兩端呈鈍圓形，直徑約0.5μm，生化代謝非�；钴S，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，個(gè)別菌株不產(chǎn)氣，大腸桿菌還能發(fā)酵多種碳水化合物，也可以利用多種有機酸鹽，是人和動(dòng)物腸道中的正常棲居菌，某些血清型的大腸桿菌在一定條件下可以引起人和多種動(dòng)物發(fā)生胃腸道感染或尿道等多種局部組織器官感染。

二、活化方法

  培養基的選擇：大腸埃希氏菌的生命力強，易存活，對營(yíng)養要求不高，常用的非選擇性培養基大多數都可以用來(lái)對大腸埃希氏菌活化及傳代，如營(yíng)養肉湯/瓊脂、胰蛋白胨大豆肉湯/瓊脂、腦心浸液肉湯/瓊脂等。

  注：對菌種進(jìn)行活化和傳代時(shí)，通常不使用麥康凱瓊脂、VRBA瓊脂、EE肉湯等選擇性培養基。

  操作方法：若菌種為凍干粉形式，按照說(shuō)明書(shū)溶解后，可直接涂布或劃線(xiàn)至NA/TSA/BHI平板上，也可加入至NB/TSB/BHI等液體培養基中；若菌種為甘油凍存管形式，從冰箱中取出速融后，NA/TSA/BHI平板上，也可加入至NB/TSB/BHI等液體培養基中；若菌種為瓷珠形式，挑取瓷珠可轉入NA/TSA/BHI平板上，也可加入至NB/TSB/BHI等液體培養基中，30-37℃培養18-24h。

三、實(shí)驗室常用保存方法

  1.斜面保存法

將NA/TSA/BHI等培養基制成斜面管，接種大腸埃希氏菌后培養至菌落生長(cháng)良好，置于2-8℃可保存至少1個(gè)月，超過(guò)1個(gè)月容易出現菌種老化、污染、變異等現象，建議及時(shí)傳代。

  2.脫脂牛奶/甘油/瓷珠冷凍保存法

可挑取非選擇性培養基上培養好的大腸埃希氏菌至脫脂牛奶/液體/瓷珠菌種保存管中制成約109CFU/mL的菌液（瓷珠保存法需搖勻后棄菌液保留瓷珠），置于冰箱或液氮罐中冷凍保存，在-70℃以下可保存兩年以上，在-20℃也能保存一年以上，大腸埃希氏菌生命力強，很容易保存數年或數十年。

四、菌種的確認

  1.菌落特征：大腸埃希氏菌麥康凱平板上由于發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，菌落呈粉紅色，并在菌落周?chē)�出現膽鹽沉淀的渾濁圈。在EMB瓊脂上發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，形成具黑色中心有綠色金屬光澤的菌落

麥康凱平板	EMB平板

  2.革蘭氏染色：大腸埃希氏菌菌為革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌，短桿菌，兩端呈鈍圓形。

  3.生化特性：大腸埃希氏菌可在44.5℃下發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣。

乳糖蛋白胨培養液

  4.IMViC試驗：此實(shí)驗可用做大腸埃希氏菌的確證試驗。

  大腸埃希氏菌與非大腸埃希氏菌的生化鑒別：

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