弧菌的活化及保存

一、弧菌簡(jiǎn)介

  弧菌（Vibrio）是常存在于河水、湖水、海水等環(huán)境中的一類(lèi)革蘭氏陰性彎桿菌，一些水產(chǎn)品中經(jīng)常會(huì )帶有致病性的弧菌，如霍亂弧菌、副溶血性弧菌、創(chuàng )傷弧菌等，可通過(guò)傷口或食道感染，某些血清型的菌株有強烈的毒性（如O1群霍亂弧菌），感染后造成嚴重的癥狀，甚至死亡。不同的弧菌具有不同的嗜鹽性，大部分弧菌在含3%左右濃度氯化鈉的培養基中生長(cháng)旺盛，因此常使用2216E培養基或3%氯化鈉TSA培養弧菌。

二、活化方法

  培養基：弧菌的活化常用2216E液體培養、2216E瓊脂或3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂。也可以使用其他非選擇培養基補充氯化鈉至3%左右使用，對于淡水類(lèi)弧菌，也可以使用TSB、BHI等培養基活化。

  操作方法：若菌種為凍干粉形式，按照說(shuō)明書(shū)溶解后，可直接涂布或劃線(xiàn)至2216E或3%氯化鈉TSA平板上，也可加入至2216E液體培養基中；若菌種為甘油凍存管形式，從冰箱中取出速融后，涂布或劃線(xiàn)至2216E或3%氯化鈉TSA平板上，或加入至2216E液體培養基中；若菌種為瓷珠形式，挑取瓷珠可轉入2216E液體培養基或平板或3%氯化鈉TSA平板上，30-37℃培養1-2天。

  注：部分海洋弧菌具有一定嗜冷的特性，如哈氏弧菌，在30-37℃雖然可以生長(cháng)，但不能表現發(fā)光特性，需在25℃以下進(jìn)行培養2-3天，可觀(guān)察到明顯的發(fā)光現象。

三、實(shí)驗室常用保存方法

1.斜面保存法

  將3%氯化鈉TSA或2216E瓊脂培養基制成斜面管，接種弧菌后培養至菌落生長(cháng)良好，置于室溫可保存1-2周。

注：一些弧菌在2-8℃會(huì )出現自溶現象，因此一般不在2-8℃保存。

2.甘油/瓷珠冷凍保存法

  可挑取培養好的弧菌至弧菌專(zhuān)用菌種液體/瓷珠菌種保存管（通常含有3%的氯化鈉）中制成約10⁹CFU/mL的菌液（瓷珠保存法需搖勻后棄菌液保留瓷珠），置于冰箱或液氮罐中冷凍保存，在-70℃以下可保存兩年以上。

  注：一些弧菌生命力相對較弱，在-20℃容易死亡，因此建議進(jìn)行低溫冷凍保藏時(shí)，盡可能在-70℃以下保存。

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