軍團菌的活化及保存

一、軍團菌簡(jiǎn)介

  軍團菌（Legionella）是自然界中廣泛存在的條件致病菌，需氧革蘭氏陰性桿菌，在20世紀70年代軍人中爆發(fā)，被稱(chēng)為軍團病，主要引起人的呼吸系統疾病，是一種胞內寄生菌。由于營(yíng)養需求特殊，早期分離困難，在一般的培養基（如營(yíng)養肉湯、TSB、腦心浸液肉湯等）上不生長(cháng)，血平板上也不生長(cháng)，現常用GVPC和BCYE進(jìn)行分離培養。初代分離培養或活化通常要在BCYE平板上35-37℃培養3-10天，在含2.5%二氧化碳氣體環(huán)境中更易培養成功，軍團菌生長(cháng)緩慢，菌落通常為灰白色，對半胱氨酸有依賴(lài)性，在半胱氨酸缺失的BCYE（BCYE-CYS）平板上不生長(cháng)，這一特點(diǎn)常用來(lái)做軍團菌的鑒定。軍團菌常存在于空調、通風(fēng)系統中，可存活數月之久，因此在公共衛生管理和檢驗中，常對空調送風(fēng)系統進(jìn)行軍團菌的檢測。

二、活化方法

  培養基：軍團菌的活化常用BCYE平板。

  氣體環(huán)境：BCYE培養基中含有ACES緩沖液和活性炭可使軍團菌不需要在二氧化碳培養箱中也能正常生長(cháng)，但初代分離和培養建議在含2.5%二氧化碳培養箱中。

  操作方法：若菌種為凍干粉形式，按照說(shuō)明書(shū)溶解后，可直接涂布或劃線(xiàn)至BCYE平板上，若菌種為甘油凍存管形式，從冰箱中取出速融后，涂布或劃線(xiàn)至BCYE平板上，35-37℃培養3-10天。

三、實(shí)驗室常用保存方法

  1.斜面保存法

  將BCYE培養基制成斜面管，接種軍團菌后培養至菌落生長(cháng)良好，置于2-8℃可保存1-2個(gè)月或更長(cháng)時(shí)間，若在表面覆蓋無(wú)菌液體石蠟隔絕空氣和減少水分蒸發(fā)可延長(cháng)保存時(shí)間。

  2.甘油冷凍保存法

  可挑取培養好的軍團菌菌苔至軍團菌專(zhuān)用菌種保存管中制成約10⁹CFU/mL的菌液，置于冰箱或液氮罐中冷凍保存，一般在-20℃可保存一年以上，在-70℃以下可保存兩年以上。

注意事項：

  1.鈉離子對軍團菌的生長(cháng)有抑制作用，因此在配制BCYE或GVPC培養基時(shí)，要確保原料中盡可能除去鈉離子，在進(jìn)行培養基pH調整時(shí)，要使用氫氧化鉀，不可使用氫氧化鈉。

  2.進(jìn)行甘油冷凍法保存時(shí)，應使用軍團菌專(zhuān)用的保存管（普通的菌種保存管一般含有鈉離子，不利于軍團菌的存活）。

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